绵羊igfbp―1基因的克隆及序列分析

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1、摘要:试验以凉山半细毛羊为研究对象,采用RT-PCR方法克隆了IGFBP-1基因的CDS全序列,生物信息学方法深入分析其序列。结果表明,IGFBP-1基因的CDS序列为792bp,编码263个氨基酸,与牛、人、鼠的CDS同源性分别为97%、76%和74%,氨基酸序列同源性分别为97%、69%和71%,GenBank登录号为FJ589639.1;IGFBP-1基因的氨基酸分子量为27.8kD,理论等电点(pl)为5.99;进化分析显示与牛、山羊等哺乳动物关系较近,与鸡、鱼类等亲缘关系较远;IGFBP-1基因存在明显的疏

2、水性区域和亲水性区域,有一个信号肽、一个跨膜区、16个磷酸化位点、6个N-糖基化位点和8个0-糖基化位点;二级结构分析显示无规卷曲、a-螺旋和折叠区域分别为61.98%、24.33%、13.69%;三级结构分析显示存在IGFBP_N和甲状腺球蛋白-I型功能域。为进一步研究绵羊IGFBP-1基因的功能奠定基础。关键词:IGFBP-1基因;克隆;绵羊中图分类号:S858.26文献标识码:A文章编号:0439-8114(2015)05-1139-05DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.201

3、5.05.028Abstract:UsingLiangshansemi-finewoolsheepasmaterial,thewholeCDSsequeneeofIGFBP-1genewasclonedwithRT-PCRandanalyzeditssequencesbybioinforma廿cs.TheresultsshowedthattheCDSsequeneeofIGFBP-1genewas792bp,encoding263aminoacids・TheCDShomologywithbovine,humanand

4、ratwas97%,76%and74%,respective!y.Theaminosequeneehomologywas97%,69%and71%,respective!y.ItsaccessionnumberinGenBankwasFJ589639.1.Itsaminomolecularweightwas27.8kD.Thetheoreticalisoelectricpoint(pl)was5.99・Thephylogeneticanalysisshowedthatitwasclosetocattleandgoat

5、andfarfromchicken,fish,etc・TheIGFBP-1hadobvioushydrophobicandhydrophilicregion,asignalpeptide,atransmembraneregion,16sitesofphosphorylation,6sitesofN-glycosylationand8sitesofO-glycosylation.Therandomcoil,a-helixandB-sheetregioninsecondarystructurewas61.98%,24.3

6、3%,13.69%,respective!y.ThetetiarystructureanalysisshowedthatithadaIGFBP_Ndomainandathyroglobulin-Itypeofdomain.ItwillprovideascientificbasisforfurtherstudyingthefunctionofIGFBP-1geneinsheep・Keywords:IGFBP-1gene;clone;sheep胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)是胰岛素样生长因子结合蛋白家族(I

7、GFBPs)的成员之一,调节胰岛素样生长因子I和胰岛素样生长因子II的促有丝分裂和新陈代谢作用[1],在低氧或饥饿、营养不良、糖尿病等不利条件下,哺乳动物外周和肝脏中IGFBP-1mRNA水平显著增加[2],降低IGFBP-1的水平,会导致葡萄糖耐受性降低、血压升高,甚至引起肥胖[3-5],IGFBP-1能抑制依赖于IGF-I的细胞生长和分化[6],高表达使生物池中IGF-I的可用量减少[7],引起动物机体(如鼠)的出生体质量下降⑻。Ou等⑼运用PIRA-RFLP技术检测北京油鸡的IGFBP-1基因5’的单核昔酸多态

8、性,发现该多态性与北京油鸡群体的生长有密切关系,赵秀华等[10]采用SSCP技术检测京海黄鸡的IGFBP-1基因外显子的单核昔酸多态性,SNP位点对京海黄鸡生长性状具有一定的影响。有关绵羊IGFBP-1基因的序列分析、单核昔酸多态性等报道较少,本研究以凉山半细毛羊为研究对象,克隆了IGFBP-1基因的全CDS序列,利用生物信息学方法分析CDS序

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