中国野牦牛blg基因的克隆及序列分析

《中国野牦牛blg基因的克隆及序列分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、题目：.中.国野墓因的.京鷹及序列分折学院：化学工程妄技术学院专此：±T.13_02_5JI姓名：学号：指导老I师：刘建忠成绩：二o—六年六月—H四日摘要众所周知，遗传多样性(Geneticdiversity)是生物多样性(Biodiversity)的重耍组成部分，而牦牛又是高原地区不可缺少的物种之一。牦牛为当地的农牧民提供包括皮毛，牛奶以及畜力等多种资源。近年来，随着机械化在广大牧区的推广,作为重要劳力的牦牛数量锐减，随之而来的是遗传资源的丧失。□前，全世界拥有约1400万头家牦牛和15000头野牦牛，其屮屮国拥有世界上最多的牦牛数量和品种(群体)[1’2]。自20世纪

2、70年代以来，牦牛群体遗传学(Populationgenetics)就广泛受到学者们的夫注，对于牺牛的认知，人们在形态学水平，细胞(染色体)水平，生理生化水平以及DNA序列的遗传变异方而都已经冇了大致的了解。冇序生物学技术的迅猛发展，近几年专家已将视野转移到牦牛的分子水平的遗传多样性研究。并且，开展有关牦牛遗传多样性的研究不仅可以有效的分析牦牛种群的遗传变异，也为后续其他物种的保护及繁育奠定基础。木研究中的野牦牛肌肉组织样品采G在四川省甘孜藏族CJ治区甘孜县东郊一屑宰场，并成功地从肌陶组织中提取到基因组DNA。根据相关文献设计了一对PCR(PolymeraseChainR

3、eaction)引物，以扩增野牦牛的乳球蛋白基因5’调控区的核苷酸序列。核苷酸序列比对结果表明，野牦牛的乳球蛋白基因(lactoglobulingene,BLG)启动区序列与报道的家特牛的序列的同源性为99.17%；与水牛BLG基因的核苷酸序列同源性为99.52%。本研究成功地采用PCR扩增的方法克隆的来自我国野牦牛乳球蛋白基因5’调控区基因片段，测定丫核苷酸组成，并比对了核苷酸序列的同源性，为开展以核苷酸序列为依据的动物遗传多样性评估提供了重要的依据。关键词：野牦牛;乳球蛋白基5’调控区;遗传多样性1前言遗传多样性是衡量一个种、亚种或种群内基因变异的依据。我们在研究一个

4、种群的遗传学问题时，必须耍考虑遗传多样性的存在。而如今生态环境每况愈下，有关物种的遗传多样性的研究迫在眉睫。如來宥朝一口遗传多样性面临丧失的险境，那么也就意味着我们人类赖以生存资源即将永久性的丧失。所以从广义上讲,保护遗传多样性就是保持生物多样性和人类赖以生存的生态环境［3］。遗传多样性可用来描述种群的遗传变异和研究维持变异的机制［4］。通过对一个物种遗传多样性的研究，就可以直接反映出该物种种群的多样性，因为物种多样性来G于进化过程中的遗传多样性［5］。再者，面对现如今糟糕的生态环境，我们在研究物种遗传多样性的向时，更多的是对生物物种的保护。我们需要对那些已经濒临灭绝的的

5、物种进行详细的遗传多样性检测，通过遗传标记等方法所敁示的结果，我们可以大致分析该物种的遗传变异，进而采取有效的保护措施。此次研究所选择的动物品种牦牛(Bosgrunniens),是分介'在海•拔3000m以上，主要生存在中国青藏高原及其毗邻的高山、亚高山地区的牛种之一［6］。大量的考古学的证据表明，牦牛起源于我国的青藏高原，□前，我国牦牛的种群数量大约为1200万头，约占世界牦牛总数的95%,另外W个牦牛的主要分布地区包括尼泊尔和印度。在遗传上是一个极为宝贵的基因库［7］。近年来，随着机械化作业在广大牧区的推广，作为传统备力的牦牛，其作用较之以前，大大减小，.其结果就是牦

6、牛数量的锐减，数量锐减不可避免地导致遗传多样性的丧失，这一现象已经引起众多专家的广泛关注。问题是一口了然的，现在看似没有优势的个体，包含了我们日后育种所必须的基因。我们可以利用其优良性状的基因培育更加优质的品种，使其具冇高产、抗病能力强以及较强适应性的特点，从而使生产力大大提高。此次研究便是针对我国四川省甘孜县野牦牛的P-乳球蛋白基凶的5”凋控区序列的遗传多样性，采用PCR扩增技术和序列测序的方法进行了一系列的研究，为后续进行遗传多样性的保护以及以核苷酸序列为基础的进化、分类等的研究进行材料的积累和条件的创造。2材料与方法2.1材料2.1.1样品廿孜野牦牛肌肉组织样品，两

7、份样品均采自四川省廿孜藏族自治区廿孜县东郊一屠宰场。2.1.2试剂和仪器1、仪器设备：电子分析天平、pH计、移液器、手提式不锈钢高压灭菌锅、电热恒温水浴锅、制冰机、微波炉、冰箱、电泳槽、电泳仪、凝胶电泳成像仪、台式离心机、双模块梯度PCR仪、超浄工作台、紫外分光光度计、恒温培养摇床、霉菌培养箱2、常规仪器：平板、酒精灯、接种环、玻璃棒、1.5mL、2mL、150PL离心管等。3、菌株，酶及试剂盒等：宿主菌DH5a,pMD18-TVector、蛋0酶K、琼脂糖、EB、6xLoadingbuffer、DNAMarker(1200b