临床医学毕业论文衰老细胞中调控胰岛素样生长因子结合蛋白3的表达

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1、衰老细胞中调控胰岛素样生长因子结合蛋白3的表达姓名，2014年6月25日作者：任文君，王群义，吕小风，毛泽斌，蒋晓刚【摘要】目的：研究在衰老细胞中调控胰岛索样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)表达增加的影响因素。方法：用Northernblot的方法显示IGFBP3基因的表达在年轻和衰老的2BS细胞巾存在差异;PCR扩增出人类IGFBP3上游包括5'UTR区的2kb的序列并用酶切得到4组不同长短的IGFBP3启动了•片段；将各片段用EffecteneTransfectionReagent试剂盒转染到年轻和衰老细

2、胞中，测出几组构建基凶片段的启动活性，确定町调控转录活性的区域；通过重叠寡核苷酸凝胶阻滞实验确定在该活性区域屮的增强子元件。结果：与年轻的2BS细胞和比，衰老的2BS细胞巾IGFBP3基因的表达升高；在IGFBP3启动子+59到-58序列之间存在着蛋白结合位点；5'ccagcctgccaagcagcgtgccccggttgc3'是IGFBP3的培强了元件。结论：在衰老的2BS细胞中IGFBP3基凶上游-37到-8的30bp序列存在一个新的増强子元件IEE(IGFBP3enhancerelement),对IGFB

3、P3的表达起到调控作用。【失键同】胰岛素样生长因子结合蛋白3;IEE(IGFBP3enhancerelement);2BS细胞[Abstract]AIM:Tostudytheinfluencingfactorsoftheincreasedexpressionofthecontrollinginsulingrowthfactorsbindingprotein3(IGFBP3)inthesenescentcells.METHODS:Northernblotwasusedtoshowofthedifferential

4、expressionoftheIGFBP3geneintheyoungandsenescent2BScells;Thesizeof2kbhumanIGFBP3upstreamsequenceincludingtheseriesofthe5'UTRareawasamplifiedbyPCR,andfourgroupsofIGFBP3promoterfragmentsofdifferentlengthswereobtainedbyenzymedigestion.TheEffcctcncTransfectionRea

5、gent(Qiagen)kitwasusedtotransfectthefragmentsintotheyoungandsenescentcells.Thepromotingactivityofseveralgroupsofconstructinggenefragmentswereevaluated.Theareaofthecontrollingtransfectionactivitywasdetermined.Theenhancerelementintheactivityareawasascertainedb

6、ysuperimposingtheoligonucleotidegelblockingexperiment.RESULTS:Comparedwiththeyoung2BScells,theexpressionoftheIGFBP3geneinthesenescent2BScellswasenhanced.Therewasaproteinbindinginthefragmentsitefromsite+59to58oftheIGFBP3enhancer.5'ccagcctgccaagcagcgtgccccggtt

7、gc3ZwastheenhancerelementofIGFBP3.CONCLUSION:Inthe30bpfragmentfromsite37to8oftheIGFBP3geneupstream,thereisanewIGFBP3enhancerelementIEE,whichplaysacontrollingroleintheexpressionofIGFBP3.［Keywords］Insulingrowthfactorbindinprotein3;IEE(IGFBP3enhancerelement);2B

8、Scells胰岛素样生K:因子(insulingrowthfactors,IGFs)是人体最重要的生长因子之一，对人体组织细胞的生长发育有广泛而重耍的调节作用。不少研究结果发现胰岛素样生长因子1(IGFI)对免疫系统及多种免疫细胞宥正性调节作用，如促进T、B淋巴细胞和粒细胞增生［1］，调节前B细胞分化，促进B细胞抗体生成［2］，增强NK细胞杀伤活性等［3］。许多免疫组织细胞也表达IGF