白斑酊等3种制剂微生物限度检查法方法验证

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1、白斑酊等3种制剂微生物限度检查法方法验证【摘要】　　目的建立白斑酊等3种制剂的微生物限度检查方法。方法采用5种阳性菌回收率实验测定其是否含抑菌成分。结果根据回收率试验结果，白斑酊、首乌合剂2种供试品试验菌的回收率试验均高于70%，提示无抑菌现象；皮炎洗剂有抑菌作用，但可通过稀释法消除抑菌作用。结论白斑酊、首乌合剂可按常规方法进行微生物限度检查；而皮炎洗剂应用培养基稀释法进行微生物限度检查。【关键词】白斑酊；首乌合剂；皮炎洗剂；微生物限度检查　　Abstract：ObjectiveToestablishthemicrobiallimittestsofthreepreparationssucha

2、sBaibantincture.MethodsThedeterminationoftherecoveryoffivepositivemicroorganismsicroorganismsorethan70%,shoixture，meanatitislotionhadantibacterialactivityinatedbymediadilutionmethod.ConclusionTheconventionalmethodofthemicrobiallimittestsmaybeusedforBaibantinctureandShouixture,ediadilutionmethodisus

3、edforDermatitislotion.　　Keyisture;Dermatitislotion；Microbiallimittest　　按2005版《中国药典》要求〔1〕，对制剂所采用的微生物限度检测方法需进行验证实验，以保证测定方法的可靠性。根据《中国药典》要求，笔者对白斑酊、首乌合剂、皮炎洗剂的微生物限度检查法进行方法验证，为规范医院制剂的微生物检查，提供实验依据。　　1器材　　1.1供试品　　白斑酊（江苏省中医院制剂室，批号060322）、首乌合剂（江苏省中医院制剂室，批号060103）、皮炎洗剂（江苏省中医院，批号051202）。　　1.2菌株　　金黄色葡萄球菌CMCC〔CMC

4、C（B）26003〕、大肠埃希菌CMCC〔CMCC（B）44102〕、枯草杆菌CMCC〔CMCC（B）63501〕、白色念珠菌CMCC〔CMCC（F）98001〕和黑曲霉菌CMCC〔CMCC（F）98003〕购自南京市药检所。　　1.3仪器　　手提压力锅（上海三申医疗器件有限公司）；恒温培养箱（余姚县恒温箱厂）；电热恒温培养箱（南京实验仪器厂）。　　2方法与结果　　2.1菌液制备　　取经37℃培养18～24h的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌肉汤培养物1ml加入9ml无菌生理盐水作10倍稀释，稀释至10-5～10-7，细菌数约为50～100cfu/ml，备用。接种白色念珠菌的新鲜培养物置改

5、良马丁培养基中，23～28℃培养24～48h，后用0.9%灭菌生理盐水稀释制成50～100cfu/ml，备用。取经20～25℃培养1周的黑曲霉斜面培养物，加水3～5ml，洗下霉菌孢子，用带有棉花的球形吸管取出菌液，用标准比浊管比浊后，用无菌生理盐水稀释为50～100cfu/ml，备用。　　2.2供试液的制备　　样品10ml，加入90mlpH7.0的氯化钠蛋白胨缓冲液，制成1∶10的供试液备用。　　2.3培养基稀释法采用0.5，0.4，0.3，0.2，0.1ml/皿的供试液，加15～20ml琼脂培养基做细菌记数，测定回收率。　　2.4回收率测定试验组：取上述供试液加入菌液（50～100cfu/

6、ml试验菌），立即倾注琼脂培养基，平行制备两个平皿，按《中国药典》2005版培养及菌落记数方法测定其菌落数。菌液组：测定加入的试验菌数。供试品对照组：取规定量供试品，按菌落记数法测定供试品本底菌数。供试品组：考察供试品制备过程中微生物影响的程度。实际收入验时，加入上述5种试验菌株，使最终菌液浓度为50～100cfu/ml。　　2.5结果　　2.5.1常规法测定3种制剂的回收率用常规法测定3种制剂回收率试验（见表1及表2），白斑酊、首乌合剂2种供试品试验菌的回收率均高于70%，证明无抑菌现象。皮炎洗剂对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、白色念珠菌的回收率低于70%。表13种制剂常规法验证试

7、验回收率（略）表23种制剂常规法验证实验回收率（略）　　2.5.2培养基稀释法培养基稀释法测定皮炎洗剂的微生物限度的验证实验（见表3），结果回收率达70%以上（0.2ml/皿供试品）。表3培养基稀释法测定皮炎洗剂的微生物限度实验（略）　　3讨论本次实验证明白斑酊、首乌合剂对5种阳性对照菌的常规法的回收率均高于70%，因此常规法可用于上述2种制剂的微生物限度检查，皮炎洗剂由于含有抑菌成分，须采用培养基稀释法（0