葡萄糖微生物限度检查法分析方法验证

《葡萄糖微生物限度检查法分析方法验证》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、葡萄糖微生物限度检查法分析方法验证目录A、验证方案1•概述2.适用范围3.验证目的4.验证小组及职责分工4.1验证小组4.2职责分工5.验证内容6.漏项与偏差及采取的纠偏牯施.7.验证结论8.验证方案批准B、验证报告1.概述2.适用范围3.验证目的4.验证小组及职责分工4.1验证小组4.2职责分工5.确证内容4.漏项与偏差及采取的纠偏措施.5.验证结论4.最终批准9.再验证周期1概述由于某些供试品抗菌活性，在建立测定方法或原测定法的检验条件发生改变时，町能影响检验结果的准确性，必须対供试品的抑菌活性及测定

2、方法的可靠性、重现性进行验证。验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法进行。对各试验菌的回收率应逐一进行验证。2适用范围适用于进厂的原辅料葡萄糖微工物限度检查——平皿法的验证。3验证廿的建立葡萄糖微41物限度分析方法，包括细菌数、爲菌数及酵母菌数的检查以及控制菌的检查，并对分析方法进行验证，以证明所采用的方法适合于葡萄糖微生物限度的检查，为日常的检测工作提供依据。4验证小组及职责分工5验证内容5.1品种：匍萄糖原料4.2验证方法：微生物限度检杳——平IIIL法5.3平皿计数方法的验证1.

3、3.1培养基及稀释液4.3.1.1培养基营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、改良马丁琼脂培养基。2.3.1.2稀释液0.9%氯化钠溶液、pH7.0的无菌氯化钠-蛋白豚缓冲液。5.3.2培养基的配制和灭菌将改良马丁琼脂培养基、营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基按照购买厂家的使用说明书进行配制，在适宜的温度条件下灭菌冷却后备用。5.3.3试验用具将试验所用的培养皿用不锈钢培养皿消毒桶盛放，其他所需用具和溶液用牛皮纸包好,在121°C的温度条件下灭菌20分钟冷却后备用。5.3.4验证试验用菌种验证试验用的菌株传

4、代次数不得超过5代(从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为笫0代)，并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。大肠埃希菌(Escherichiacoli)(CMCC(B)44102)金黄色衙萄球菌(Staphylococcusaureus)(CMCC(B)26003)枯草芽他杆菌(Baci1Iussubtilis)(CMCC(B)63501)白色念珠菌(Candidaalbicans)(CMCC(F)98001)黑曲W(Aspergillusniger)(CMCC(F)98003)5.3.5菌液制

5、备：取经32.5°C培养18〜24小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽砲杆菌营养肉汤液体培养物，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml含菌数为50〜lOOcfu的菌悬液。取经25.5°C培养24〜48小时的白色念珠菌改良马丁培养物，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml含菌数为50〜lOOcfu的菌悬液。取经25.5°C培养5〜7天的黑1111霉改良马丁斜而培养物，加0.9%无菌氯化钠溶液3〜5ml,将砲子洗脱。然后，吸出抱子悬液至无菌试管内，用9ml0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml含50〜lOOcfu

6、的他子悬液。5.3.6活菌计数活菌计数结果见下表活菌计数(cfu/ml)5.3.7供试液制备取葡萄糖10g,加入pH7.0的无菌氯化钠-蛋白月东缓冲液至100讯溶解，混匀，作为1:10的供试液。5.3.8验证方法a试验组用吸管分别取上述1:10供试液lml和含试验菌50〜lOOcfu的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽他杆菌、口色念珠菌、黑曲霉的菌悬液，每种试验菌平行测定两份。前3种菌加入平皿中并加入营养琼脂培养基，后2种菌加入平川L中并加入玫瑰红钠琼脂培养基。b菌液组(测定所加的试验菌数)取和试验组一样

7、多的试验菌加入平血后培养。c供试品对照组取和试验组一样稀释级别的供试液lml,加入平血中，平行操作4份，2份加入营养琼脂培养基并培养，另2份加入玫瑰红钠琼脂培养基并培养。d稀释剂对照组用吸管分别取稀释液1ml和含试验菌50〜lOOcfu的人肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽他杆菌、门色念珠菌、黑曲霉的菌悬液，置平皿中，每种试验菌平行测定两份。前3种菌加入平皿中并并加入营养琼脂培养基，后2种菌加入平皿中并加入玫瑰红钠琼脂培养基。e阴性对照用吸管分别取PH7.0的无菌氯化钠-蛋白豚缓冲液51巻平皿中，分别加入营

8、养琼脂培养基和玫塊红钠琼脂培养基并培养。5.3.9培养及计数独立平行操作3份。分别将玫瑰红钠琼脂培养基在25.5°C培养72小时，逐H计数，以72小时的菌落数报告,营养琼脂培养基在32.5°C培养48小时逐日计数，以48小时的菌落数报告。5.3.10试验结果试验组菌落计数(cfu/ml)实验次数123平均菌落数大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽他杆菌口色念珠菌黑曲霉菌液组菌落计数(cfu/ml)实验次数123平均菌落数大肠埃希菌金