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《大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌整合子分布与esbls耐药基因的研究 》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌整合子分布与ESBLs耐药基因的研究【摘要】目的研究产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)菌株整合子分布以及在ESBLs基因水平转移中的作用。方法采用PCR方法检测产ESBLs和非产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的整合酶基因,分析整合子在产TEM、CTX和SHV型ESBLs菌株中的分布及经质粒转移的情况。结果产ESBLs菌株中blaTEM、blaCTX和blaSHV基因检出率分别为58.2%、74.7%和32.9%；产ESBLs菌同时具有≥1种的ESBLs基因,blaSHV+CTX基因检出率为12.9%、blaCTX+TEM为9.8%、
2、blaSHV+TEM为8.7%和blaSHV+CTX+TEM为5.2%。结论产ESBLs菌株中blaTEM、blaCTX和blaSHV基因与整合子具明显相关性；整合子携带着1个以上的多个耐药基因盒,与宿主菌的多重耐药性密切相关。【关键词】耐药基因超广谱β内酰胺酶整合子【Abstract】ObjectiveTostudythedistributionofclassⅠintegroninextended-spectrumbeta-lactamases(ESBLs)-producingEscherichiacoliandKlebsiellapneumoniaean
3、ditscontributioninhorizontaltransferofESBLsgenes.MethodsThepresenceofclassⅠintegronamongESBLs-producersandnon-ESBLs-producersofEscherichiacoliandKlebsiellapneumoniaeerasechainreaction(PCR).Thecorrelationandco-transferbetultidrugresistanceinESBLs-producingstrains.【Keyl)的培养基筛选接合菌,制备模
4、板用于PCR扩增。1.8PCR耐药菌基因〔2〕根据GenBank公布的Ⅰ类整合子整合酶基因和blaSHV、blaCTX和blaTEM基因序列，采用Primer软件设计引物(表1)。反应体系均为25μl,其中缓冲液2.5μl,10mmol/L4×dNTP0.5μl,50μmol/上下游引物各1μl,DNA多聚酶0.25μl,DNA模板1μl,超纯水18.75μl。根据不同引物设立不同PCR反应条件。以ATCC700603肺炎克雷伯菌作SHV型阳性对照，以TEM-26型大肠埃希菌作TEM型阳性对照,产物经电泳,在紫外线下观察结果,并在凝胶上成像。1.9DNA序列
5、分析〔3〕PCR扩增的基因片段经电泳后,切下相应条带纯化,进行DNA测序,结果在GenBank序列数据库进行同源性分析(BLASTN)。1．10统计学处理〔2〕细菌耐药性分析用阳性的扩增产物为TEM-1基因,blaCTX阳性的扩增产物为CTX-M-3基因,而blaSHV阳性的扩增产物则分别为SHV-1、SHV-5、SHV-11和SHV-12。blaTEM、blaCTX和blaSHV基因的PCR琼脂凝胶电泳如图1～3。图1TEM基因PCR扩增电泳图图2SHV基因PCR扩增电泳图(1：DNA分子量标志,2000bp梯带；2:阴性对照；3～5:临床菌株。)图3CT
6、X基因PCR扩增电泳图2.3blaTEM、blaCTX和blaSHV的基因检测结果产ESBLs菌株的blaTEM、blaCTX和blaSHV基因检出率分别为58.2%、74.7%和32.9%，产ESBLs菌同时具有≥1种的ESBLs基因如blaSHV+CTX、blaCTX+TEM、blaSHV+TEM和blaSHV+CTX+TEM基因检出率分别为12.9%、9.8%、8.7%和5.2%。其中93株产ESBLs大肠埃希菌中,blaTEM基因检出率为81.7%(76/93),blaCTX基因检出率为94.6%(88/93),blaSHV基因检出率14.0%(13
7、/93)，blaSHV+CTX基因检出率12.9%(12/93)，blaCTX+TEM基因检出率8.6%(8/93)，blaSHV+TEM基因检出率9.7%(9/93),blaSHV+blaCTX+blaTEM基因检出率4.3%(4/93)。101株产ESBLs肺炎克雷伯菌中,blaTEM基因检出率为36.7%(37/101),blaCTX基因检出率为56.4%(57/101),blaSHV基因检出率为50.5%(51/101),blaSHV+CTX基因检出率12.9%(13/101)，blaCTX+TEM基因检出率10.9%(11/101)，blaSHV+
8、TEM基因检出率7.9%(8/101),blaSHV
