大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌整合子分布与ESBLs耐药基因的研究

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1、大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌整合子分布与ESBLs耐药基因的研究【摘要】目的研究产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)菌株整合子分布以及在ESBLs基因水平转移中的作用。方法采用PCR方法检测产ESBLs和非产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的整合酶基因,分析整合子在产TEM、CTX和SHV型ESBLs菌株中的分布及经质粒转移的情况。结果产ESBLs菌株中blaTEM、blaCTX和blaSHV基因检出率分别为%、%和32.%；产ESBLs菌同时具有≥1种的ESBLs基因,blaSHV+CTX基因检出率为

2、%、blaCTX+TEM为%、blaSHV+TEM为%和blaSHV+CTX+TEM为%。结论产ESBLs菌株中blaTEM、blaCTX和blaSHV基因与整合子具明显相关性；整合子携带着1个以上的多个耐药基因盒,与宿主菌的多重耐药性密切相关。【关键词】耐药基因超广谱β内酰胺酶整合子【Abstract】ObjectiveTostudythedistributionofclassⅠintegroninextended-spectrumbeta-lactamases(ESBLs)-producing

3、EscherichiacoliandKlebsiellapneumoniaeanditscontributioninhorizontaltransferofESBLsThepresenceofclassⅠintegronamongESBLs-producersandnon-ESBLs-producersofEscherichiacoliandKlebsiellapneumoniaeweredetectedbypolymerasechainreaction(PCR).Thecorrelationan

4、dco-transferbetweenintegronandgenescodingforSHV,CTXandTEMwereThepositiverateofblaTEM、blaCTXandblaSHV%、%、32.%respectively;blaSHV+CTX、blaCTX+TEM、blaSHV+TEMandblaSHV+CTX+TEMwas%、%、8.%、%respectively.ConclusionThepositiverateofblaTEM、blaCTXandblaSHVwasrela

5、tedwithclassⅠintegron;TheintegronwithantibioticresistancegenecassettecontributestomultidrugresistanceinESBLs-producingstrains.【Keywords】antibioticresistantgene;ESBLs;integronESBLs是导致革兰阴性菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药的重要机制。质粒、转座子和整合子对耐药基因在细菌间的水平转移起着重要作用。整合子可特异性地俘获和表达外

6、源基因盒,并以质粒或转座子为载体在细菌间移动,导致耐药基因的快速和广泛播散。整合子可携带对氨基糖苷类、喹诺酮类、磺胺等耐药基因盒。整合子大致可分为Ⅳ类,其中Ⅰ类在捕获和表达耐药基因中最常见。因此本文通过研究产ESBLs菌株中Ⅰ类整合子的分布和性质,明确菌株的播散趋势,有效监控细菌耐药。由于肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌是临床最常见的产ESBLs菌,其中CTX-M、SHV和TEM是最常见的ESBLs型别，本文对我院XX年肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的临床分离株,检测Ⅰ类整合子在产TEM、CTX和SHV型ESB

7、Ls菌株中的分布,明确Ⅰ类整合子在产ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的流行和播散中的临床意义。1材料与方法菌株来源81株肺炎克雷伯菌和201株大肠埃希菌均为我院临床标本中分离并按全国统一操作规程［1］。标本主要包括血液、尿液、痰和其他分泌物。仪器试剂VITEK-2型全自动微生物分析仪、ID-GN鉴定卡、AST-GN09药敏卡由法国Bio-Merieux公司生产;VITEK比浊计(V1210)由日本生产；PCR扩增仪为美国PERKINELMER公司9600型基因扩增仪；日本三洋MDF型超低温冰箱;

8、德国Hettich公司22R型低温超速离心机;美国水套式恒温培养箱。菌种鉴定、药敏所有实验菌株分离纯化后按VITEK-2的使用要求配制成菌悬液和稀释液,分别填充到ID-GN和AST-GN09卡中,用VITEK-2仪器自动完成细菌的鉴定和药敏试验。质控菌株由卫生部临床检验中心提供的标准菌株大肠埃希菌(ATCC5922)、铜绿假单胞菌(ATCC7853),药敏质控结果符合NCCLS药敏质控要求。1．5超广谱β内酰胺酶检测按照NCCLS000年版推荐的纸片扩散表型确证法进行检测。用肺炎克