姜黄素对人肝L02细胞胆固醇合成与转运蛋白表达的影响

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1、·主要英文缩略语索英文缩写英文全拼中文名称NAFLDnon-alcoholfattyliverdisease非酒精性脂肪肝病FFAfreefattyacids游离脂肪酸TCtotalcholesterol总胆固醇TGtrigelyceride甘油三酯CEcholesterylester胆固醇酯HDLhighdensitylipoprotein高密度脂蛋白LDLlowdensitylipoprotein低密度脂蛋白VLDLverylowdensitylipoprotein极低密度脂蛋白DEPCDiethyPyrocarbonate焦炭酸二乙酸PBSphosphat

2、e-bufferedsaline磷酸盐缓冲液DMSODimethylSufloxide二甲基亚砜HPLChighperformanceliquidchromatography高效液相色谱1····姜黄素对人肝L-02细胞胆固醇合成及转运蛋白表达的影响研究生：程静屏导师：阳学风教授专业:消化内科中文摘要目的：研究姜黄素对人肝L－02细胞脂滴形成、胆固醇合成限速酶－HMG-CoA还原酶和转运蛋白Caveolin-1表达及细胞内胆固醇、胆固醇酯含量的影响，了解姜黄素对肝细胞胆固醇合成及转运的作用。方法：取正常人肝L-02细胞，和经50％胎牛血清造模24小时建立的脂变肝

3、细胞模型，共同作为研究对象。实验分为7组：第一组为空白对照，即正常肝细胞组；第二组为脂变肝细胞组；第三组至第六组在脂变细胞中分别加入不等量姜黄素，使姜黄素终浓度分别为0、12.5umol/l、25umol/l、50umol/l和100umol/l；第七组为阳性对照组，即脂变肝细胞加入普罗布考，使其终浓度为50umol/l；第八组为正常肝细胞加50umol/l姜黄素对照组。每组加药后继续孵育24小时。油红O染色观察每组细胞内脂滴的形成情况。高效液相色谱法（HPLC）检测细胞内胆固醇（TC）、游离胆固醇（FC）和胆固醇酯(CE)的含量，并计算细胞内CE/TC比值及培

4、养基FC含量。RT-PCR法检测每组肝细胞HMG-CoA还原酶及转运蛋白caveolin-1mRNA水平的表达，从而确定姜黄素降低细胞CE的最佳浓度，作出量效关系。然后以姜黄素的最佳浓度处理细胞不同的时间，即0小时、6小时、12小时、24小时，再分别检测各组细胞HMG-CoA还原酶和caveolin-1mRNA水平的表达，高效液相色谱法检测细胞胆固醇含量，确定姜黄素降低细胞CE的最佳时间，作出时效关系。实验数据以±s表示，用SPSS13.0统计软件对数据进行统计分析，以P<0.05作为差异显著性标准。结果：经50％胎牛血清孵育24小时后，倒置显微镜下可观察到L－

5、02细胞2····脂肪变性，胞浆内充满大量可被油红O红染的脂滴，且高效液相色谱法检测细胞内外胆固醇含量均明显增加（P﹤0.05）,示脂变肝细胞模型成功建立。经不同浓度的姜黄素（0umol/l、12.5umol/l、25umol/l、50umol/l、100umol/l）处理脂变肝细胞24小时，结果显示：油红O染色表明，细胞内脂滴较处理前减少。姜黄素呈浓度依赖性的降低脂变肝细胞细胞内TC、CE，增加培养基中FC含量，同时呈浓度依赖性的减少HMG-CoA还原酶的表达、增加caveolin-1mRNA的表达。将100umol/l的姜黄素与脂变肝细胞共同处理0，6，12

6、，24小时,结果显示：细胞内脂滴呈时间依赖性减少；姜黄素呈时间依赖性的降低脂变细胞内TC、CE，增加培养基中FC含量，同时呈时间依赖性的减少HMG-CoA还原酶的表达、增加caveolin-1mRNA的表达。结论：1、脂变人肝L-02肝细胞中总胆固醇及胆固醇酯的含量均增加；2、姜黄素能降低脂变人肝L-02细胞总胆固醇及胆固醇酯含量，增加游离胆固醇的外流；3、姜黄素降低胆固醇作用可能与caveolin-1的上调、HMG-CoA还原酶的下调有关；关键词：姜黄素，人肝L－02细胞，胆固醇合成，转运蛋白，HMG-CoA还原酶，Caveolin-13····Effects

7、ofCurcuminonCholesterolSynthesisandTransportinhumanL-02hepatocyteABSTRACTObject:investigatetheformationoflipiddropletsandexpressionofcholesterolrate-limitingenzyme－HMG-CoAreductaseandtransportedprotein－caveolin-1,detecttheamountofcholesterolonhumanL-02hepatocyteunderthecontrolofcurcu

8、min,tofindou