尼古丁对巨噬细胞肝x受体α表达及胆固醇外流的影响

《尼古丁对巨噬细胞肝x受体α表达及胆固醇外流的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、尼古丁对巨噬细胞肝X受体α表达及胆固醇外流的影响【关键词】尼古丁；胆固醇外流；巨噬细胞；肝X受体　　ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatethecharacteristicsofliverXreceptoralfa(LXRα)anditstargetgeneexpressionashumanmacrophagesundernicotine.MethodsHumanmonocytederivedmacrophagesediatedhumanmonocytederivedmacrophagech

2、olesterolefflux,andmRNAexpressionofLXRαandsomeofitstargetgenesbeingdetected,themacrophagesanmonocytederivedmacrophageseofitstargetgenesmRNAexpressioninvolvedcholesterolmetabolism,andfacilitatedexpressionofsomeinflammatorygenes.ConclusionNicotinecanregulatefoamc

3、ellformationbyinhibitingLXRpathacrophage;liverXreceptor　　动脉粥样硬化的早期病变为血管内皮下富含胆固醇的巨噬细胞聚集，并在各种复杂的机制下，巨噬细胞在动脉壁转变为泡沫细胞，从而启动动脉粥样硬化病变的发生。在巨噬细胞内部，肝X受体(liverXreceptor,LXR)及LXR诱导的信号是介导其脂代谢的重要分子基础，也是巨噬细胞的致动脉粥样硬化的重要环节[1]。尼古丁(nicotine)被认为是烟草中致动脉粥样硬化的一种重要成分，但对其致病机制还知之甚少。Lau等[

4、2]用LDLR-/-小鼠模型，经过尼古丁处理，发现动脉壁局部病变明显增大，一些核因子κB(nuclearfactorκB,NFκB)的目的基因表达上调，表现为增强的炎症效应；来自于腹腔的巨噬细胞也呈现这种变化。所以，尼古丁的致动脉粥样硬化作用与其炎症效应相关。本研究旨在探讨尼古丁对LXR信号途径的影响以及对巨噬细胞的胆固醇外流中的作用。　　1材料与方法　　1.1材料与试剂　　21名健康成人外周血液，提取外周血单核细胞作为本研究的实验材料。Ficoll淋巴细胞分层液、20g/L锥虫蓝染液、小牛血清、二甲基亚砜(DMSO

5、)、0.2g/LEDTA(武汉亚法生物公司)，完全RPMI1640培养液(Gibco公司)，[3H]胆固醇、apoAⅠ、TO901317(Sigma公司)，佛波酯(phorbol12myristate13acetate,PMA)(AlexisBiochemicals公司)，Trizol试剂(Promega公司)，用于RTPCR的试剂和MarkerDL2000(TaKaRaBiotrchology公司)，尼古丁(中山生物公司)。　　1.2外周血单核细胞的分离　　抽取患者动脉血10mL，采用Ficoll(密度

6、1.077g/L)密度梯度离心法分离收集外周血单个核细胞。以1×107/mL细胞浓度加入6孔细胞培养板，每孔2mL，置37℃，50mL/LCO2贴壁培养2h，收集贴壁的细胞，姬姆萨染色纯度90%以上，20g/L锥虫蓝染液染色示细胞活力95%以上。　　1.3巨噬细胞的转化　　按文献[3]，将收集的单核细胞调整为3.0×106/mL，转入6孔培养板，在含有100mL/L小牛血清，青霉素100u/mL，链霉素100μg/mL的RPMI1640培养液，加3.2×10-7mol/LPMA，50mL/LCO2，37℃的培养箱中孵育

7、24h。　　1.4巨噬细胞的处理及胆固醇外流的测定　　根据文献[1，4]，100μg/L的尼古丁对巨噬细胞的免疫信号途径发挥作用，而无明显的细胞毒作用，2μmol/L的TO901317对LXR的激动作用最佳，故以样本中加终浓度0、100μg/L的尼古丁和同时加或不加2μmol/L的TO901317进行分组。　　参照文献[5]描述的方法，将巨噬细胞调整为3.0×106/mL的密度，转入6孔细胞培养板，在含有100mL/L小牛血清，青霉素100u/mL，链霉素100μg/mL的RPMI1640培养液中加0.2μCi/L

8、[3H]胆固醇共培养48h，用PBS液洗涤细胞。获得的巨噬细胞调整为3.0×106/mL并转入6孔细胞培养板，在上述培养液中，按分组要求加入试剂，培养24h。再用PBS液洗涤细胞，在无血清含10μg/LapoAⅠ新培养液中培育细胞12h，用闪烁计数法检测培养液和细胞的[3H]胆固醇。胆固醇流出用[培养液中CPM(每分钟记数)/总