尼古丁对大鼠中脑α-7型神经烟碱胆碱能受体表达的影响

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1、Y905314尼古丁对大鼠中脑oL一7型神经烟碱胆碱能受体表达的影响Regulationof仪一7NeuronalNicotinicAcetylcholineReceptorsbyNicotineinMidbrain硕士研究生·赵謇伟指导教师·翟秀岩中国医科大学沈阳110001．中国二零零六年六月GandldateforMasterDogroe：2maoJiawelSupe州sor：2InolXluysnChinaMedicalUniversityGraduateSchooINodh2ndRoad92，HopingWard，Shewan9110001，ChinaJuno，2006中国医科大

2、学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：圭茎垒日期：塑≤￡!中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离校后，发表论

3、文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，以采用影印、缩印或其他手段保存论文。尼古丁对大鼠中脑仅一7型神经烟碱胆碱能受体表达的影响目的吸烟可以致癌，孕妇主动或被动吸烟会导致流产、胎儿发育不良及后代中枢神经系统功能异常，如认知障碍、注意力涣散、学习和记忆能力低下、低智商以及行为异常等。在世界各国，每年因吸烟引起的死亡人数占全部死亡人数的20％，吸烟所致死亡占死因分析的首位。烟草已成为人类一大公害。尽管人们

4、都知道吸烟有很多危害，然而人们还是持续吸食难以戒掉，这是由于烟草中含有尼古丁，尼古丁是导致吸烟成瘾的主要生物碱。学者们一直在探索尼古丁致瘾机制，试图搞清致瘾通路，寻找切入点，为戒烟提供有效的方法。目前认为，尼古丁主要通过中脑皮质边缘和黑质一纹状体多巴胺能通路产生成瘾作用。在中脑皮质边缘系统中，神经元胞体位于腹侧被盖区(VTA)，尼古丁通过对胞体上神经烟碱胆碱能受体的作用，使下游伏隔核的多巴胺释放增加，从而使人感到愉快并为之形成癖好。这种愉快感和癖好的形成驱动了成瘾过程，其机制对毒品滥用和犒赏行为的加强都起到了重要的作用。此外，在黑质一纹状体多巴胺能通路中，神经元胞体位于黑质区(SN)，尼古

5、丁能增加多巴胺在纹状体尾状核和豆状核区域的释放。在哺乳动物脑内，尼古丁通过“一7型神经烟碱胆碱能受体(or．一7nAChRs)来发挥作用，该受体与尼古丁具有高亲和性，尼古丁与之作用后，导致离子通道开放，受体构型改变，使钙离子内流，从而改变神经元的功能，所以仪一7nAChRs被认为是与尼古丁作用的主要受体。迄今为止，尼古丁对大鼠中脑d一7nAChRs的调节机制还不能解释清楚。本研究应用原位杂交、免疫组织化学和western—blot技术，从模型鼠脑和模式细胞人手，在转录和翻译水平研究尼古丁对大鼠中脑d一7nAChRs蛋白质和mRNA表达及分布的影响，进一步探索尼古丁致瘾作用的机理。方法1．建

6、立大鼠急性暴露尼古丁的动物模型。将大鼠随机分成二个实验组和一个对照组，每组10只。实验组每日8：30分别皮下注射尼古丁0．4mg／kg．d，30．0mg／kg．d，每天一次，连续七天；对照组在同一时间皮下注射同等体积的生理盐水。最后一次注射后12小时进行心脏灌流，获取固定的脑组织。2．尼氏染色定位各脑区。，3．免疫组织化学染色观察大鼠脑0／．一7nAChRs表达量，并进行统计学分析。4．原位杂交实验检测大鼠脑仅一7nAChRmRNA的表达量，并进行统计学分析。5．PCI2细胞传代培养。PCI2细胞接种于RIPM1640培养液中，培养液中加入NGF(50ng／m1)诱导PCI2细胞分化。6．

7、Western—blot实验检测尼古丁对PCI2细胞仅一7nAChRs的影响。NGF诱导和无NGF诱导的PCI2细胞各分为四组，设为对照组，三个实验组(10tzM尼古丁24h；1001xM尼古丁24h；100tzM尼古丁48h)。结果一．建立了大鼠急性暴露尼古丁的动物模型Wistar雄性大鼠，体重180—200克，对照组与2个实验组各10只，分笼单独喂养。实验组大鼠注射尼古丁后状态良好，2只高剂量组的大鼠分别在第二天和第