大鼠宫内暴露尼古丁影响神经管发育的形态学观察

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1、中国医科大学硕士学位论文大鼠宫内暴露尼古丁影响神经管发育的形态学观察姓名：文江申请学位级别：硕士专业：发育生物学指导教师：翟秀岩20050501中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切

2、相关责任。论文作者签名：圣三=!：日期：中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期问论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：指导教师签名：大鼠宫内暴露尼古丁

3、影响胚胎神经管发育的形态学观察目的孕妇主动或被动吸烟对胎儿的危害越来越受到重视，其有害物质主要是烟中的尼古丁等，尼古丁通过胎盘直接进入胎儿体内，使胎儿缺氧，导致流产、胎儿宫内发育迟缓、低体重、早产、死亡，已确定与被动吸烟有因果关系。哺乳动物神经管在发育的特定期间(即生殖致畸期)易于受到各种致畸物的影响，而尼古丁又是一种很易通过胎盘的有毒性、易挥发的神经致畸物，所以无论主动吸烟，或被动吸烟，尼古丁都可迅速进入羊水中，直接影响神经管的正常发育。故神经管发育不良与吸烟的关系越来越受到关注。JoschkoMA等报导，尼古丁可造成神经

4、管的上皮细胞的崩解和坏死，并与尼古丁剂量成直线依赖关系，提出尼古丁可作为神经系统的致畸物。TaraSankarRoy等运用全胚胎培养技术，将孕10天的大鼠胚胎在不同浓度尼古丁的培养液中培养，发现前脑、中脑和后脑的神经管各部分，出现广泛的细胞毒性损害表现，即细胞质空泡，细胞问空隙变大和坏死细胞的急剧增多。Wang等发现尼古丁暴露下的神经上皮细胞排列不规则、微绒毛变短、卷幽，且胞质内出现许多空泡。从而认为尼古丁能诱发神经管细胞变性、坏死、丢失，导致神经管形成与分化障碍。以上观点支持尼古丁作为嗜神经药物与神经管缺陷的发生有一定的联

5、系。但也有不同的意见，如Evans等(1979)发现吸烟并不会在整体上增大先天畸形的可能性。迄今为止，尼古丁影响神经管发育的研究大多是从形态学角度对细胞的光镜和电镜下微细结构的改变丽进行的。本文立足于尼古丁对神经系统发育过程的影响，在建立尼古丁致神经管发育不良的动物模型基础上，利用神经管上皮细胞分化前后的标志物nestin和s一100B来观察尼古丁对神经系统早期增殖、迁移和分化过程的干扰，形成神经管和腹侧导水管的形态学改变，从而为尼古丁致神经管发育不良进而导致神经管畸形提供实验依据。神经管闭合不良及脑室系统发育障碍可迸一步影

6、响胎儿的后续发展，包括神经系统、骨骼脊柱系统、及表皮肌肉组织均可能出现问题，如无脑儿，脊柱裂、脊髓末端膨出等均是严重的畸形，遣一类先天性疾病统称为“神经管缺损”，或“神经管闭合不全”(NeuralTubeDefect)。这些婴儿的出生严重影响人口质量，并给社会和家庭带来了沉重的负担。因而探讨尼古丁对神经管发育影响不仅是一个医学问题，也是备受瞩目的社会问题。方法1．建立妊娠期宫内暴露尼古丁的大鼠模型2．HE染色法观察孕13天神经管顶板基板的组织结构及孕16天鼠胚中缝组织结构改变2。1冷冻切片的制备2．2HE染色3．荧光抗体法观

7、察孕13天及16天鼠胚3．1免疫组织化学法观察孕13天鼠胚神经管Nestin的表达3．2免疫组织化学法观察孕16天鼠胚中缝组织Nestm和S一1000的表达4．建立暴露尼古丁的细胞模型，免疫细胞化学法鉴定细胞成分4．1无菌条件下取胎鼠中后脑区神经上皮细胞做原代培养4．2Nestin免疫细胞化学法鉴定细胞5．HE染色法比较不同浓度尼古丁影响下的神经上皮细胞的细胞结构及突起生长的改变6．MTI'比色法比较不同浓度的尼古丁影响下的神经上皮细胞增殖能力结果1．建立了妊娠期宫内暴露尼古丁的大鼠动物模型1．1肉眼观察：尼古丁组与对照组分

8、别获得孕鼠6只，单独分笼喂养。尼古丁组孕鼠注射尼古丁后体重增长较对照组无明显差异。孕鼠于孕13和16天取材，尼古丁孕13天组孕鼠3只共获得36只胚胎，死胎3只；对照·2·组孕鼠3只获得42只鼠胚，死胎1枚；尼古丁孕16天组3只孕鼠获得30只鼠胚，死胎6只，对照组3只孕鼠共获得34只，死胎2