褪黑素缓解尼古丁暴露损害小鼠卵泡发生和发育的研究

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1、分类号密级UDC单位代码10435硕士学位论文褪黑素缓解尼古丁暴露损害小鼠卵泡发生和发育的研究Protectiveeffectsofmelatoninagainstnicotine-induceddisorderofmousefolliculogenesis研究生姓名：王玉风指导老师：程顺峰副教授学科专业：动物遗传育种与繁殖研究方向：动物生殖发育与基因工程中国·青岛二0一八年六月Protectiveeffectsofmelatoninagainstnicotine-induceddisorderofmousefolliculogenesisThesissu

2、bmittedtoQingdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomyYu-FengWang(CollegeofAnimalScienceandTechnology)Supervisor:A/Prof.Shun-FengChengQingdao·ChinaJune,2018独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的

3、研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月青岛农业大学硕士学位论文摘要

4、褪黑素缓解尼古丁暴露损害小鼠卵泡发生和发育的研究摘要伴随西方国家育龄女性吸烟率呈增加趋势，烟草燃烧产生的尼古丁对女性生殖健康及其后代造成严重影响，如原始卵泡数量减少和卵子质量下降。但尼古丁影响原始卵泡形成的分子机制至今尚未报道，本研究着重于尼古丁暴露对小鼠原始卵泡形成的影响。本研究以出生24小时内新生小鼠为实验材料，采用尼古丁腹腔注射，按1mg/kg体重/天尼古丁持续5天给药处理。借助实时定量PCR（Q-RCR）、蛋白免疫印迹（WesternBlot）和免疫组化（IF）等实验技术,实验结果显示：与尼古丁和褪黑素处理组相比，尼古丁处理组Cyst卵母细胞数占总

5、的MVH阳性细胞数比例升高15%；卵母细胞特异表达基因Lhx8、Figlα和Sohlh2表达量下降；氧化应激水平升高，AMPKα1蛋白表达量升高，抗自噬蛋白AKT和mTOR表达量下降，自噬相关蛋白LC3B和Beclin-1表达量升高；卵母细胞中形成较多的自噬体杯。此外，本研究还利用0天卵巢体外培养技术，探究尼古丁对体细胞增殖的影响。实验结果发现：10μM尼古丁连续5天暴露0天卵巢，抑制Cyst解聚和原始卵泡形成；与对照组相比，尼古丁处理组有20%的体细胞增殖减少，加入1μM褪黑素提高体细胞增殖。综上，尼古丁抑制Cyst解聚和原始卵泡卵泡形成，并对卵母细胞造

6、成损伤，且该损伤作用会一直持续到小鼠性成熟即出生后21天，褪黑素可以缓解尼古丁对卵巢造成的损伤。关键词：尼古丁；褪黑素；原始卵泡；自噬1青岛农业大学硕士学位论文AbstractProtectiveeffectsofmelatoninagainstnicotine-induceddisorderofmousefolliculogenesisAbstractWithsignificantnumbersofwestcountries′womencontinuetosmokebeforeandduringpregnancy,nicotinedoharmtowome

7、n′andherdauters′reproductivehealthysuchasreducingfolliclenumersandthequalityofeggs.Buttherearelessresearchonnicotineimparingprimordialfolliclesassembly,weneedfurtherexplorateitsmechanism.Inthisstudy,weinjectednewbornwhithin24hoursmicewith1mg/kgbodyweight/daynicotinelast5days.Witht

8、heaidofQ-PCR,WesternBlotandImmuno