纳米氧化锌暴露影响小鼠卵母细胞发育的研究

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1、分类号密级UDC单位代码10435硕士学位论文纳米氧化锌暴露影响小鼠卵母细胞发育的研究ExposuretoZincOxideNanoparticlesAffectsOocyteDevelopmentintheMouse研究生姓名：翟秋月指导老师：沈伟教授学科专业：动物遗传育种与繁殖研究方向：动物生殖发育与基因工程中国·青岛二0一八年六月ExposuretoZincOxideNanoparticlesAffectsOocyteDevelopmentintheMouseThesissubmittedtoQingdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentofthe

2、RequirementfortheDegreeofMasterofAgronomyQiu-YueZhai（CollegeofAnimalScienceandTechnology）Supervisor:Prof.WeiShenQingdao.ChinaJune,2018独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签

3、名：时间：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日青岛农业大学硕士学位论文摘要纳米氧化锌暴露影响小鼠卵母细胞发育的研究摘要纳米氧化锌（Zincoxidenanoparticles,nZnO）是常用的金属氧化物纳米颗粒之一，由于其良好的抗菌性、紫外吸收性以及光催化性能，已被广泛应

4、用于医药卫生、化妆品、陶瓷、电子工业等领域。先前研究证实，nZnO可能会对女性生殖系统和生育力产生不利影响，然而关于nZnO暴露损害卵母细胞早期发生的研究尚未见报道。鉴于此，本研究借助卵巢体外发育模型和动物活体实验，系统研究了nZnO暴露对卵母细胞早期发生及后期卵泡发育的影响，结果如下:利用机械法分离获得12.5天雌性胎鼠生殖嵴，添加不同浓度nZnO体外培养6天，利用激光共聚焦显微镜和透射电镜技术（Transmissionelectronmicroscope,TEM）观察到nZnO可进入到生殖嵴内部并在细胞质内积累；同时检测了DNA损伤标记蛋白γH2AX在减数分裂卵母细胞中的表达及分布情况，

5、发现nZnO处理组γH2AX表达异常的卵母细胞比例显著高于对照组，DNA同源重组修复蛋白RAD51在nZnO处理组的阳性细胞比例也高于对照组；但是，ZnSO4及微米氧化锌（Bulkzincoxidenanoparticles,bZnO）处理组均未检测到γH2AX和RAD51的蛋白表达水平发生显著变化。此外，nZnO处理组Bax/Bcl-2的mRNA和蛋白水平均显著升高，TUNEL阳性细胞比例也显著增加。因此，体外试验表明nZnO暴露会使卵母细胞DNA损伤增加，并导致凋亡水平升高，进而损害小鼠卵母细胞早期发育。为了进一步研究孕期母体nZnO暴露是否会影响胎儿及雌性后代的卵巢发育，我们给怀孕12

6、.5天的孕鼠连续两天尾静脉注射16mg/kgnZnO，选取17.5天胎鼠、出生3天以及21天小鼠卵巢进行分析，结果显示：与对照组相比，nZnO体内暴露增加了17.5天胎鼠卵母细胞减数分裂粗线期DNA损伤，抑制了出生3天小鼠卵巢中原始卵泡的形成，导致小鼠21天时各级卵泡的数目与比例均发生变化，但是后代卵母细胞质量及受精能力均未发生显著改变，即卵泡发育相关基因及蛋白的表达，以及卵母细胞体外成熟率未发生显著变化。综上所述，一定剂量的nZnO暴露会损害胎儿卵子发生过程，造成后代卵泡发育异常。关键词：纳米氧化锌；卵母细胞；减数分裂1青岛农业大学硕士学位论文AbstractExposuretoZincO

7、xideNanoparticlesAffectsOocyteDevelopmentintheMouseAbstractZincoxidenanoparticles(nZnO)areoneofthemostcommonlyusedmetaloxidenanoparticles,whichhasbeenwidelyusedinmedicine,cosmetic,ceramics,electronicsforthe