褪黑素和热应激对小鼠精子质量和胚胎发育的影响

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1、分类号：墨墨!垒：§密级：公珏单位代码：学号：!QQ墨鱼．．．．2．．．．0．．．．1．．．0．．．4．．．．4．．．—5．褪黑素和热应激对小鼠精子质量和胚胎发育的影响Effectofmelatoninandheatstressonspermqualityandembrv0cIevelopmentoImlce．'●1l·-■●学位申请人：潘晓靖指导教师：李相运教授学科专业：动物遗传育种与繁殖学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二O一三年五月三十一日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研

2、究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑皇垦盔些盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：潘研啦螽签字日期：如J弓年f月三日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑皇垦盔些盘堂有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权塑兰垦壅些盘堂可以将学位论文的全部或部

3、分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：冶甜眦氧导师签名：翻包导师签名：／喜硼段．签字日期：矽哆年多月夕日签字日期：加眵年∥月2日学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：电话：邮编：摘要本实验以ICR公鼠为受试动物，检测三种不同的热应激程度(37．30℃，22d；36．32℃，12dffl35．78。C，20d)对公鼠的精子质量以及早期胚胎发育的损伤情况，以及用饮水和注射两种方式添加褪黑素后对热应激损伤是否有所缓解。试

4、验分为四个组：常温组(C组)、常温加褪黑素组(CM组)、热应激组(H组)、热应激加褪黑素组(HM组)。热应激结束后记录了四个组每只公鼠的体重和睾丸重、精子密度、活力、顶体完整性、膜完整性并观察睾丸组织形态变化。各组公鼠均和正常母鼠交配后记录了受精率、卵裂率、四细胞发育率、八细胞发育率、桑葚胚率、囊胚率以及囊胚细胞数和凋亡数。试验一条件为最高温度37．30℃、热应激时间22天，饮水添加褪黑素。热应激组和对照组相比精子密度、活力明显下降，尤其活力由46．76％降低至0．71％。睾丸重以及睾丸指数差异极显著(p<0．01)，体

5、重差异不显著。对照组和热应激组分别在饮水中添加浓度为0．1mg／ml褪黑素，精子密度、活力和睾丸指数均没有改善。试验二最高温度由37．30℃降低为36．32℃，热应激时间由22天减少为12天。虽然精子密度、活力以及睾丸指数等差异仍显著，但是热应激程度明显下降，热应激组精子活力和密度为对照组的60．67％和51．31％。对照组和热应激组分别在饮水中添加浓度为0．1mg／ml褪黑素，精子密度、活力和睾丸指数仍旧没有明显改善。试验三最高温度由37．30℃降低为35．78℃，最高温度降l'k氏1．5。C，热应激时间为20天。受到

6、热应激后，精子密度、顶体完整性、膜完整性和对照组相比，差异均显著，睾丸重及睾丸指数差异极显著(p<0．01)。热应激组睾丸组织生精上皮细胞数量明显减少，排列疏松，生成的精子数量减少，曲精细管可见空泡。此次采用腹膜注射的方式添加褪黑素，浓度为10mg／kg，对精子质量和睾丸形态仍没有作用。热应激公鼠和正常母鼠交配后，受精率和各个阶段的早期胚胎发育率均受到影响，明显下降，添加褪黑素后，虽受精率、胚胎发育率和热应激组相比仍差异不显著，但是有明显数值上的改善。热应激添加褪黑素组受精率和热应激组受精率分别为70．15％和61．82

7、％。添加褪黑素后卵裂到囊胚的早期胚胎发育率和热应激组相比均提高了13。54％、11．43％、11．33％、15．92％、9．33％。热应激组和对照组囊胚细胞数差异显著(54．56vs38．61，p<0．05)，囊胚凋亡数差异显著(6．83％．VS11．82％，p<0．05)，热应激组和热应激添加褪黑素组的囊胚细胞数和凋亡数差异亦显著(38．61VS．49．37，p<0．05和11．82％vs．5．57％，p<0．05)。说明添加褪黑素没有改善精子表型，但是明显改善了热应激公鼠精子DNA损伤，使得形成的受精率和胚胎发育率明

8、显升高，尤其是显著改善了囊胚质量。关键词：公鼠；热应激；精子损伤；褪黑素；胚胎发育Effectofmelatoninandheatstressonspermqualityandembryodevelopmentofmice．Postgraduate：PanXiaojingMajor：AnimalGeneticsBre