精子DNA损伤对胚胎发育潜能的影响

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1、温州医学院硕士毕业论文答辩委员会主席：李继承教授(浙江大学医学部基础医学系)答辩委员会成员：郑飞云教授(温州医学院附属第一医院)赵军招教授(温州医学院附属第一医院)论文答辩日期：2013-05-26目录一，舨中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·i英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·4前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·7材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一9结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··14讨论与结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一18参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·22致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、··26二、综述综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··27参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·32三、独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一34㈣8删7Ⅲ5眦7圳9帆3㈣Z¨U¨¨nU厂眦Y温州医学院硕士毕业论文精子DNA损伤对胚胎发育潜能的影响中文摘要目的在人类辅助生殖技术(ART)临床中，精子DNA损伤是影响其结局的重要因素之一，并且越来越受到生殖医学工作者的重视。在实施ART前，检测精子DNA断裂指数(DFI)，采取措施获得DNA损伤较小或无损伤的精子对改善ART结局十分必要。有报告显示，当精子接触外源氧自由基(ROS)时，DNA断裂明

3、显增加，断裂的形式有全基质模式、产生无碱基位点、缺失、DNA交联和染色体重组。因此，精子在成熟过程中特别容易出现不同形式的线粒体DNA损伤和核体DNA损伤。有研究表明，在异常的精液样本中存在高发的线粒体DNA损伤，这一点表明了其在男性不育中的作用。DNA损伤的精子仍然有能力使卵子受精，但是胚胎形成发育的程度与DNA损伤密切相关。卵母细胞对精子DNA损伤有一定的修复功能，当DNA损伤的程度超过卵母细胞的修复能力时就会对胚胎质量产生影响。因此，检测精子DNA损伤并优选无损伤精子用于受精，对于提高ART结局具有非常重要的意义。现在检测精子DNA损伤常用的方法

4、有彗星实验、精子染色质结构分析、末端转移酶介导dUTP末端标记法及精子染色质扩散实验等。本研究选择的方法是SCD方法检测精子DFI，探讨DFI与胚胎质量、胚胎种植率及临床妊娠率的关系，旨在研究精子DNA损伤对胚胎发育潜能的影响，为提高ART安全性和临床治疗效果提供实验依据。方法研究对象为2010．10"--2011．12期间于本中心行IVFflCSI助孕的758例不育夫妇。参照世界卫生组织(WHO)的标准，经计算机辅助精液分析系统(CASA)分析精子密度及活动力，根据Tygerberg’S标准评价精子形态，以此了解精子的质量。采用精子Halosperm

5、试剂盒(Halotechdna，Spain)说明书介绍的方法行SCD检测，在200倍光镜下观察，比较精子核和核周围晕轮大小，计算精子DNA碎片指数。行IVF治疗患者的精液标准为正常精液指标、精子密度10．20x106／ml或活动率>30％和洗涤精子数量>500，000。行ICSI治疗男性患者精液指标标准为精子密度-<5．10x106／ml或活动率-<20．30％和洗涤数量-<500，000。女方患者均为单纯输卵管因素，入选所有周期获卵数在4个或以上。患者采用常规的超促排卵治疗方案，注射hCG后32"---36h在阴道超声介导下取卵，采用常规IVF或IC

6、SI进行体外受精，于卵母细胞受精后2～3日行胚胎移植。剩余胚胎继续培养成囊胚，观察D5、D6囊胚形成率。根据患者移植胚胎个数及种温州医学院硕士毕业论文植个数计算胚胎种植率。结果1、一般情况共纳入患者758例(758个周期)，女性患者平均年龄为31。22-卜3．93，男性患者的平均年龄为33．55+4．64。患者平均获卵数为12．13+5．05，卵子成熟率为90．8l％，受精率为74．37％，卵裂率为97．18％，临床妊娠率59．1％。IVF治疗组共有652例，其中DFI值<15％组有471例，DFI值≥15％组有287例，IVF治疗组中低年龄组共有26

7、7例，高年龄组共有385例。ICSI治疗组共有106例，其中DFI值<15％组有33例，DFI值≥15％组有73例。2、精子DNA损伤对常规IVF和ICSI临床结果的影响(1)所有患者根据治疗方法分成ICSI组和IVF组。每组再按照DFI值分为2组，(1)组DFI值<15％，(2)组DFI值>15％。结果显示ICSI组(1)和(2)两组之间受精率、卵裂率、D3优胚率、D5囊胚形成率、D6囊胚形成率、胚胎种植率及艋床妊娠率比较，差异均不存在统计学意义(尸>O．05)。在IVF组，高DNA碎片组胚胎种植率和临床妊娠率显著高于低DNA碎片组(P

8、但受精率、卵裂率、D3优质胚胎率、D5囊胚形成率和D6囊胚形成率两组间无显著差异(尸>O．05