针刺对抑郁大鼠海马神经因子表达的影响

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1、针刺对抑郁大鼠海马神经因子表达的影响作者：徐世芬，庄礼兴，唐纯志【摘要】【目的】观察针刺对抑郁模型大鼠海马脑源性神经营养因子(BDNF)和神经生长因子(NGF)表达的影响，探讨针刺的抗抑郁机制。【方法】选用SD大鼠随机分为正常组、模型组、针刺组、西药组，应用孤养和长期不可预见的慢性应激刺激复制抑郁大鼠模型，同时西药组按2mg·kg-1·d-1剂量给予氟西汀灌胃，针刺组予以针刺百会、心俞、肝俞穴，每天1次，共21d。采用免疫组化方法检测各组大鼠海马BDNF和NGF蛋白表达的情况。【结果】与正常组比较，模型组BDNF和NGF阳性细胞数量显著减少(P<001)，

2、而针刺组、西药组BDNF和NGF阳性细胞数显著增加(与模型组比较，P<005)。【结论】针刺可以增加抑郁大鼠海马BDNF与NGF表达，这可能是针刺抗抑郁的分子机制之一。【关键词】抑郁症/针灸疗法;海马/病理学;神经营养因子;神经生长因子;疾病模型，动物;大鼠研究表明，抑郁症的发病机制及治疗可能涉及神经元可塑性的假说，神经元可塑性失调可导致抑郁症[1]。神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)与脑源性神经营养因子(brainderivedneurotrophic13factor,BDNF)是神经因子家族的两个成员，在神经系统的生长发育中有

3、重要作用，对神经元的可塑性及其形成和生存起着重要的调节作用[2]。本研究采用孤养和长期不可预见的慢性应激刺激复制抑郁大鼠模型，观察针刺对模型大鼠海马神经元BDNF和NGF表达的影响，现报道如下。　　1材料与方法　　11实验动物和分组SPF级成年SD大鼠，体质量220～290g，雌雄各半。由广州中医药大学动物中心提供，实验动物合格证编号：2007A017。首先采用Openfield法[3]作行为学评分，选择得分相近的32只大鼠，适应性喂养7d后，随机分为正常组、模型组、氟西汀组(西药组)、针刺组，每组8只。正常组每笼饲养4只，雌雄分开。用普通大鼠饲料喂养，饮用自

4、来水，室温控制在20℃～25℃，湿度60%～80%。实验在广州中医药大学动物实验中心进行(合格证编号：0007047)。　　12试剂与仪器BDNF、NGF免疫组化试剂盒购自中山生物试剂有限公司广州分公司。33’二氨基联苯胺四盐酸盐(DAB)显色剂，兔抗NGF和BDNF多克隆抗体：一抗(工作浓度为1∶100)、二抗、三抗，40g/L多聚甲醛，磷酸盐缓冲液(PBS)均购自武汉博士德生物有限公司。CX21BIMSET生物显微镜(OLYMPUS公司生产)，图像分析仪(北京航空航天大学24版本)。13　　13动物模型的复制按照参考文献方法[3]进行抑郁症模型大鼠

5、的复制。模型组、针刺组、西药组每笼饲养1只，各组分别接受21d各种不同的应激刺激，包括断水24h;断食24h;夹尾1min;4℃冰水游泳5min;摇晃：1次/s，5min;昼夜颠倒;电击足底，电压50mV，每5s刺激1次，间歇5s，共刺激10次。每天随机选择1种刺激，每种刺激平均使用3次，共21d。　　14治疗方法给予大鼠各种不可预知的应激刺激同时，西药组按照2mg·kg-1·d-1剂量给予盐酸氟西汀(美国礼来公司)，将药物溶于生理盐水中灌胃，每天1次。针刺组每天应激刺激前1h进行治疗，根据《实验针灸学》[4]大鼠穴位定位方法取穴，选取百会、心俞、肝俞。穴位常规

6、消毒，选用华佗牌025mm×13mm针灸针进行针刺。百会向尾部斜刺，进针深度约为2mm，心俞、肝俞(左右两侧穴位交替使用，每次取单侧)斜刺5mm，每穴均匀捻转刺激30s，留针15min。每天1次，共21次。　　15检测指标和方法　　151取材方法各组大鼠在治疗21d结束后，全部断头取脑，剥离全脑，于冰浴下迅速分离出海马，40g/L多聚甲醛固定6h，再依次浸入200、300g/L的蔗糖PBS(pH7132)中，直至组织块下降到底部，恒冷冰冻切片机连续冠状切片，取海马与齿状回互包平面，片厚40μm，直接置于01mmol/LPBS液中，4℃冰箱保存。　　1

7、52BDNF、NGF免疫组织化学染色载玻片经防脱片剂PolyLysine处理，体积分数3%H2O2室温作用10min以灭活内源性酶，蒸馏水洗3次。热修复抗原：将切片浸入001mol/L枸橼酸盐缓冲液(pH60),微波炉加热至沸腾后断电，间隔5～10min，反复1～2次。冷却后PBS(pH72～76)洗涤2次，加50mg/L的牛血清白蛋白(BSA)封闭液，室温20min。甩去多余液体，不洗，滴加1∶100稀释的一抗(抗BDNF、NGF)，37℃放置1h。PBS洗涤2min×3次，滴加生物素化山羊抗小鼠IgG，37℃、20min。PBS洗涤2min×3次，

8、滴加链霉亲