尼古丁对巨噬细胞肝x受体α表达及胆固醇外流的影响

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1、尼古丁对巨噬细胞肝X受体α表达及胆固醇外流的影响作者：钱宗杰，曾秋棠，邱龄，肖传实【摘要】　　目的通过研究尼古丁对巨噬细胞的肝X受体α(LXRα)及其下游的基因表达和胆固醇外流的影响，探讨尼古丁对LXR信号系统的作用。方法分离人外周血单核细胞，并转化为巨噬细胞。在尼古丁的作用下，观察巨噬细胞的aopAⅠ介导的胆固醇外流的变化和LXR及其下游一些基因mRNA表达。结果尼古丁显著影响巨噬细胞中一些涉及胆固醇代谢及炎症反应的基因表达，同时降低aopAⅠ介导的胆固醇外流。结论尼古丁影响巨噬细胞LXR信号途径，促进泡沫细胞形成，使动脉粥样硬

2、化发生发展。【关键词】尼古丁；胆固醇外流；巨噬细胞；肝X受体　　ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatethecharacteristicsofliverXreceptoralfa(LXRα)anditstargetgeneexpressionaswellascholesteroleffluxfromhumanmacrophagesundernicotine.MethodsHumanmonocytederivedmacrophageswerecollected.BeforeapoAImediatedhuma

3、nmonocytederivedmacrophagecholesterolefflux,andmRNAexpressionofLXRαandsomeofitstargetgenesbeingdetected,themacrophageswere11inducedwithorwithoutnicotine.ResultsPreincubationofhumanmonocytederivedmacrophageswithnicotine,cholesteroleffluxwassuppressedtoapolipoproteinAI.

4、NicotinealsoinhibitedLXRαandsomeofitstargetgenesmRNAexpressioninvolvedcholesterolmetabolism,andfacilitatedexpressionofsomeinflammatorygenes.ConclusionNicotinecanregulatefoamcellformationbyinhibitingLXRpathwayandproduceatherogenesis.　　KEYWORDS:nicotine;cholesterolefflux;

5、macrophage;liverXreceptor　　动脉粥样硬化的早期病变为血管内皮下富含胆固醇的巨噬细胞聚集，并在各种复杂的机制下，巨噬细胞在动脉壁转变为泡沫细胞，从而启动动脉粥样硬化病变的发生。在巨噬细胞内部，肝X受体(liverXreceptor,LXR)及LXR诱导的信号是介导其脂代谢的重要分子基础，也是巨噬细胞的致动脉粥样硬化的重要环节[1]。尼古丁(nicotine)被认为是烟草中致动脉粥样硬化的一种重要成分，但对其致病机制还知之甚少。Lau等[2]用LDLR-/-小鼠模型，经过尼古丁处理，发现动脉壁局部病变明显增大，一

6、些核因子κB(nuclearfactorκB,NFκ11B)的目的基因表达上调，表现为增强的炎症效应；来自于腹腔的巨噬细胞也呈现这种变化。所以，尼古丁的致动脉粥样硬化作用与其炎症效应相关。本研究旨在探讨尼古丁对LXR信号途径的影响以及对巨噬细胞的胆固醇外流中的作用。　　1材料与方法　　1.1材料与试剂　　21名健康成人外周血液，提取外周血单核细胞作为本研究的实验材料。Ficoll淋巴细胞分层液、20g/L锥虫蓝染液、小牛血清、二甲基亚砜(DMSO)、0.2g/LEDTA(武汉亚法生物公司)，完全RPMI1640培养液(Gibco公

7、司)，[3H]胆固醇、apoAⅠ、TO901317(Sigma公司)，佛波酯(phorbol12myristate13acetate,PMA)(AlexisBiochemicals公司)，Trizol试剂(Promega公司)，用于RTPCR的试剂和MarkerDL2000(TaKaRaBiotrchology公司)，尼古丁(中山生物公司)。　　1.2外周血单核细胞的分离　　抽取患者动脉血10mL，采用Ficoll(密度1.077g/L)密度梯度离心法分离收集外周血单个核细胞。以1×107/mL细胞浓度加入6孔细胞培养板，

8、每孔2mL，置37℃，50mL/L11CO2贴壁培养2h，收集贴壁的细胞，姬姆萨染色纯度90%以上，20g/L锥虫蓝染液染色示细胞活力95%以上。　　1.3巨噬细胞的转化　　按文献[3]，将收集的单核细胞调整为3.0×1