姜黄素对人结肠癌lovo细胞vegf表达的影响

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1、姜黄素对人结肠癌Lovo细胞VEGF表达的影响袁琦张征胡小宣湖南省人民医院肝病内科，湖南长沙410005[摘要]目的研究姜黄素体外对人结肠癌Lovo细胞血管内皮生长因子VEGF表达的影响。方法不同浓度（0μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L）姜黄素处理2013年8月—2014年2月中南大学提供的人结肠癌细胞株Lovo24h后，用Real-timePCR检测姜黄素对人结肠癌细胞株血管内皮生长因子VEGFmRNA表达的变化，用SO中，得到终浓度为10mmol/L的母液，临用时用完全细胞培养液稀释到所需浓度。Trizol、逆转录试剂盒购自大连宝生物公

2、司，引物由大连宝生物公司合成。蛋白提取液及ECL发光试剂盒购自Pierce公司，兔抗人VEGF多克隆抗体及羊抗兔二抗lgG购自SantaCruz公司。1.2细胞的培养及处理人结肠癌Lovo细胞接种于含10%胎牛血清1640培养基，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养，隔天换液，待细胞长至对数生长期时，用0.25%胰蛋白酶消化传代。取对数生长期的Lovo细胞，实验分组为对照组（姜黄素0μmol/L，加入等量DMSO），姜黄素5μmol/L，10μmol/L，20μmol/L，40μmol/L组，处理后再置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中培养24h。1.3Real-tim

3、ePCR采用Trizo1试剂一步法提取细胞总RNA，紫外分光光度计测定总RNA浓度，计算OD260/280，比值在1.8~2.0的RNA标本用于反转录。总RNA按说明书进行逆转录反应合成cDNA，逆转录产物cDNA用于Real-time-PCR扩增。VEGF引物：5acute;端：5acute;-GGGGGATCCGCCTCCGAA-ACCATGAACTT-3acute;及3acute;端：5acute;-CCCGAATTCTCCTGGTGAGAGA-TCTGGTT-3acute;，变性、退火温度为94℃与72℃，40个循环。利用标准曲线，根据样品CT值计算出样品中所含的模板量。1.4分期

4、、淋巴结转移有关[6]。且临床观察发现大肠癌患者术前血清VEGF水平与大肠癌的浸润、转移密切相关[7]。有研究者利用同源重组将结肠肠癌细胞系中VEGF-A敲除后发现，当细胞缺失了VEGF信号后，细胞的生长受到了明显的抑制，且细胞对化疗药物5-氟尿嘧啶的敏感性增强[8]，而在临床上仅仅通过阻断细胞表面的VEGF受体来治疗结直肠癌效果是有限的。目前研究发现，姜黄素能够对消化系肿瘤有很好的抑制作用，其药理活性主要表现在能够下调核转录因子（NF-kB）的活性，诱导细胞周期停滞和细胞凋亡，抑制血管生成[9]。在人结肠癌HCT116细胞中，姜黄素可有效抑制结肠腺癌细胞集落生长和侵袭能力[10]。不同浓

5、度姜黄素作用人结肠癌SePCR及RNA及蛋白的表达，发现各姜黄素组（5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L）与对照组比较，VEGF的mRNA及蛋白的表达明显下降，差异有统计学意义（P＜0.05），且姜黄素的作用浓度越高，VEGF的表达量越低，该作用呈剂量依赖，提示姜黄素能通过抑制人结肠癌细胞Lovo中VEGF的表达来抗结肠癌血管形成，抑制结肠癌细胞的生长和转移。此结果与贾佳等的观点一致，他们发现姜黄素能够下调结肠癌细胞HT-29中β-catenin、VEGF的表达[12]。在多个结肠癌细胞系中，均有研究证实姜黄素能下调VEGF的表达，进一步可利用建立的结肠癌裸

6、鼠移植瘤模型，从体内水平研究姜黄素能否下调瘤组织VEGF的表达，且姜黄素是否通过NF-KB信通路来下调人结肠癌细胞VEGF的表达，该机制也有待进一步研究。VEGF是抗癌药物治疗的新靶点，姜黄素作用后的人结肠癌Lovo细胞VEGF水平下降，提示姜黄素可能通过下调VEGF的表达抑制了VEGF促进肿瘤新生血管的作用，从而抑制了结肠癌的增殖和转移。该研究为姜黄素的临床应用提供新的理论依据。.jyqketastin在大肠癌组织中的表达[J].南方医科大学学报，2007，27（10）：1584-1587.[7]李德川，冯海洋，徐笑红.大肠癌患者血清VEGF水平的临床研究[J].癌症，2001，20（3

7、）：314-316.[8]SamuelS，FanF，DangLH，etal.Intracrinevascularendothelialgrooresistanceofhumancolorectalcancercells[J].Oncogene，2011，30（10）：1205-12.[9]赵鹏，蔡辉.姜黄素药理作用研究进展[J].中医药临床杂志，2012，24（4）：380-382.[10]范钰，张尤历，许则丰.姜黄素抑