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《姜黄素诱导结肠癌lovo细胞凋亡作用和机制探究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、姜黄素诱导结肠癌LoVo细胞凋亡作用和机制探究［摘要］目的：探讨姜黄素促人结肠癌LoVo细胞凋亡的生物学作用及其调控机制。方法：体外培养人结肠癌LoVo细胞，0〜20mg・L-1不同浓度姜黄素处理后，采用MTT比色法测定姜黄素对细胞的增殖抑制作用，利用透射电镜观察细胞的超微结构，采用PI单标流式细胞仪测定细胞周期分布，AnnexinV-FITC/PI双标法检测细胞凋亡率；采用RT-PCR检测Bax,Bcl-2,Caspase-3,Bcl-xLmRNA表达水平。结果：MTT检测显示姜黄素能显著抑制人结肠癌LoVo细胞的生长、增殖，呈现浓度和时间效
2、应关系；透射电镜结果显示姜黄素能使LoVo细胞发生形态学改变，呈现典型凋亡细胞特征；流式细胞仪分析显示姜黄素能阻滞细胞周期于S期，诱导细胞发生凋亡。RT-PCR检测显示姜黄素可促进细胞中Bax,Caspase-3mRNA表达，抑制Bcl-2,Bcl-xLmRNA表达。结论：姜黄素能显著抑制人结肠癌LoVo细胞的增殖并促进其凋亡，这种生物学效应可能与激活Bax表达、抑制Bcl-2和Bcl-xL表达而活化Caspase-3的信号通路有关。［关键词］姜黄素；结肠癌；LoVo；细胞凋亡结肠癌是一种严重威胁人类健康的恶性肿瘤。随着人们生活习惯和饮食结构的
3、改变，我国结肠癌的发病率呈逐年上升趋势。除了传统的手术、放疗与化疗外，由于天然药物的多成分、多靶点、多环节、多途径效应，使人们认识到'‘回归大自然”的重要性，植物源化合物的抗肿瘤研究已逐步成为临床抗肿瘤药物研究的热点。姜黄素是从草本植物姜黄的根茎中提取的一种天然多酚，为姜黄的主要活性成分。在亚洲一些国家，姜黄素一直被广泛地用作治疗炎症、哮喘、肝功能紊乱等疾病的药物、食品着色剂和调味剂。此外，姜黄素还在许多肿瘤细胞中发挥着抗炎，抗氧化，抗肿瘤和化学预防作用［1-2］。许多体内外实验也证实姜黄素能抑制肿瘤生长，显著减少瘤体的数目，减轻多种致癌因素对
4、机体的损害［3-5］。由于姜黄素的药理作用十分广泛，其抗癌作用机制较为复杂，目前仍未完全阐明。本研究拟探讨姜黄素对结肠癌细胞株LoVo的增殖抑制和凋亡诱导作用机制，为进一步阐明姜黄素的抗肿瘤机制提供更多的实验依据。1材料1.1药物及试剂姜黄素(C1386-10g,Sigma公司进口分装，临用时以少量DMS0溶解，再加培养液稀释至所需浓度，其中DMS0的终浓度2.2透射电镜观察细胞超微结构用0〜20mg・L-1梯度浓度的姜黄素作用LoVo细胞24h后，用0.25%胰蛋白酶消化离心，以0.01mol•L-lPBS(pH7.3)清洗2遍，1000r・
5、minT离心，收集细胞，迅速加入3%戊二醛固定3ho用0.01mol•L-lPBS(pH7.3)浸洗3次，加2%琼脂使细胞成团凝固，于1%饿酸中固定2h。再用0.01mol•L-lPBS(pH7.3)充分浸洗2次，梯度丙酮(50%〜100%)逐级脱水，进入氧化丙烯。环氧树脂Epon812逐步浸透、包埋，最后在Epon812中于60°C下聚合48h。超薄切片机切片，醋酸双氧铀和柠檬铅双染后，透射电子显微镜下进行观察。2.3PI单标法检测细胞周期将0〜20mg・L-l梯度浓度姜黄素处理24h的LoVo细胞消化离心，收集各组细胞，用0.01mol•L
6、-lPBS(pH7.3)轻洗2次；1000r•min-1离心5min,弃上清，加入2niL盐水G,吹打悬浮细胞，缓慢加入6mL预冷的95%乙醇，冰浴30min,4°C固定4h；1000r•min-1离心固定的细胞5min,弃上清，加入0.01mol•L-lPBS(pH7.3)6mL混匀,1000r•min-1离心5min,弃上清；加入1.5mL0.01mol•L-lPBS(pH7.3)吹打均匀，重悬细胞，再加入1.5mL的PI染液，避光染色30min后，以1X106个/mL上样流式细胞仪，检测细胞周期分布。2.4AnnexinV-FITC和PI
7、双标检测细胞凋亡将0〜20mg・L-l梯度浓度姜黄素处理24h的LoVo细胞消化离心，收集各组细胞，用0.01mol•L-lPBS(pH7.3)轻洗2次;1000r•min-1离心5min,弃上清，用500nLIX膜联蛋白结合缓冲液重悬细胞，加入5nLAnnexinV-FITC避光染色10min,再加入10uLPI于室温下避光孵育5min；上流式细胞仪检测荧光强度，分析细胞凋亡百分率。2.5RT-PCR检测Bax,Bcl~2,Caspase-3,Bcl~xLmRNA表达水平将0〜20mg•L-1姜黄素处理24h的LoVo细胞消化离心，收集细胞，
8、选用AxyPrepTMMultisource总RNA小量制备试剂盒提取细胞总RNA,操作步骤按照试剂盒说明书进行。提取的总RNA经1%琼脂糖凝胶电泳和
