资源描述：
《hbvx基因转染l02细胞及其蛋白产物对cⅱta和hla-dr表达的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、HBVX基因转染L02细胞及其蛋白产物对CⅡTA和HLA-DR表达的影响张卿，李俊刚，刘玉元，赵博，张绪清（400038重庆，第三军医大学西南医院全军感染病研究所）[摘要]目的探讨脂质体和电穿孔法在HBVX基因转染L02细胞中的差别及X基因蛋白产物对CⅡTA和HLA-DR表达的影响。方法构建HBVX基因重组表达质粒，通过电穿孔和脂质体法转染人正常肝细胞L02细胞，以绿色荧光蛋白（enhancegreenfluorescentprotein，EGFP）表达水平评价转染效率，流式细胞技术检测L02细胞HBVX蛋白的表达水平。
2、RT-PCR、流式细胞技术及western-blot分析L02细胞、转染空载体以及转染HBVX基因重组表达质粒的L02细胞CⅡTA和HLA-DR的表达差别。结果采用阳离子脂质体Lipofectamine2000的转染效率为（6.4±3.5）%，显著低于电穿孔法（41.46±5.8）%，P<0.01。脂质体法转染的L02细胞HBVX蛋白表达水平为(5.1±3.9)%，显著低于电穿孔方法(37.5±4.1)%表达，P<0.01。转染了HBVX基因重组表达质粒的L02细胞检测到CⅡTA和HLA-DRmRNA和蛋白表达，而L02
3、细胞本身及转染空载体的L02细胞未检测到CⅡTA和HLA-DR的表达。结论HBVX基因真核表达载体pHBx-IRES2-EGFP通过电穿孔法转染L02细胞较脂质体法有明显较高的转染效率和更高的目的基因的表达，HBVX基因诱导了L02细胞中CⅡTA和HLA-DR的表达。[关键词]HBVX基因；脂质体；电穿孔；HLA-DR；CIITA[中图法分类号][文献标志码]ATransfectionofHBVXgeneintohumanlivercelllineL02andeffectofHBVXproteinonCIITAandHL
4、A-DRexpressionZhangQing,LiJungang,LiuYuyuan,ZhaoBo,ZhangXuqing(DepartmentofInfectiousDiseases,SouthwestHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing,400038,China)[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheefficiencydifferencebetweenlipofectionandelectroporationforHBV
5、XgenetransfectionandtheeffectsofHBVXprotein(HBx)onCIITAandHLA-DRexpressioninhumanlivercelllineL02.MethodsRecombinantexpressionplasmidpHBx-IES2-EGFPwasconstructedandtransferredintonormalhumanlivercelllineL02withLipofectamine2000andelectroporation,respectively.Thet
6、ransfectionefficiencywasevaluatedbytheexpressionofenhancedgreenfluorescentprotein(EGFP)underafluorescentmicroscope.FlowcytometrywasusedtodetectHBxproteinexpression.RT-PCR,flowcytometryandWesternblotwereusedtodetermineHLA-DRandCIITAexpressioninL02cellline,L02celll
7、inetransfectedwithpIES2-EGFP,andL02celllinetransfectedwithpHBx-IES2-EGFP,respectively.ResultsThetransfectionefficiencywithLipofectamine2000was(6.4±3.5)%,significantlylowerthanthatwithelectroporation(41.46±5.8)%(P<0.01).TheHBxexpressionintheL02celllinetransfectedb
8、yLipofectamine2000wassignificantlylowerthanthatintheL02celllinetransfectedbyelectroporation[(5.1±3.9)%vs.(37.5±4.1)%,(P<0.01)].TheCIITAandHLA-DRexpressionwason
