葡萄糖对l02细胞lxrα与angptl3基因表达的影响

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1、葡萄糖对L02细胞LXRα与ANGPTL3基因表达的影响作者：曾建涛，王继红，黄家利，程梅【摘要】目的：研究葡萄糖对L02细胞肝X受体(LXRα)与血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)基因表达的影响，探讨LXRα在糖尿病和脂代谢联系中的作用.方法：用5.6,7.0,11.1,28.0和33.0mmol/L的葡萄糖培养L02细胞，5.6mmol/L组作为对照组.用胆固醇酶联法测定各组细胞内胆固醇含量，采用RTPCR方法检测LXRα和ANGPTL3的mRNA表达量.结果：高浓度葡萄糖可促进L02细胞内胆固醇含量上调LXRα和ANGP

2、TL3mRNA表达，变化差异均有统计学意义(P<0.05).结论：高浓度葡萄糖增加ANGPTL3表达，可能是通过增加细胞内总胆固醇含量而激活LXRα，而LXRα的激活则引起ANGPTL3基因的高表达.【关键词】血管生成素样蛋白3；肝X受体α；糖尿病　　【Abstract】AIM:ToinvestigatetheeffectsofglucoseonexpressionsofLXRαandANGPTL3inL02cell,andtoexploretherelationofLXRαentofdiabetesmellitusacpa

3、niedia.METHODS:L02cellsediumscontaining5.6,7.0,11.1,28.0and33.0mmol/Lglucose,amongmol/Lglucosegroupedbycholesterolenzymelinkassays.TheLXRαandANGPTL3mRNAinedbyreversetrancriptasepolymerasechainreaction(RTPCR).RESULTS:TheexpressionofLXRαandANGPTL3mRNAincreasedayinterfe

4、reANGPTL3mRNAthroughincresasingtotalcholesterol,activatingLXRα.TheactivationofLXRαupregulatestheexpressionofANGPTL3.　　【Keyellitus　　0引言　　肝X受体（liverXactivatedreceptor,LXRs）是核受体超家族的成员，包括两种同源亚型LXRα(NR1H3)和LXRβ（NR1H2）.LXRs作为甾醇类感受器调节一系列与脂质代谢相关基因的表达.血管生成素样蛋白3（angiopoietinl

5、ikeprotein3,ANGPTL3）是新的LXRs靶基因，在脂质代谢中有重要作用［1-2］.本研究以人肝细胞株L02为研究对象，从细胞水平研究葡萄糖对LXRα和ANGPTL3基因表达的影响，探讨LXRα在糖尿病和脂代谢联系中的作用.　　1材料和方法　　1.1材料人肝细胞株L02（重庆医科大学基础医学研究所）；RPMI1640普通培养基（美国Gibco公司）；新生牛血清（杭州四季青公司）；RT试剂盒（日本Toyobo公司）；PCR试剂盒（广州东盛生物公司）；LXRα,ANGPTL3和βActin引物（上海生物工程公司合成）；胆

6、固醇酶联试剂（浙江伊利康公司）；PCR仪,GelDoc100凝胶成像仪（美国BioRad公司）.　　　　1.2方法　　1.2.1细胞分组及培养L02细胞以每孔3×105个细胞接种于培养板.在含100mL/L新生牛血清的RPMI1640培养液中培养36h后，随机分为5组（G1～G5），分别在不同浓度葡萄糖的培养液中培养24h.G1组为对照组.　　1.2.2胆固醇含量测定5组L02细胞用RPMI1640培养基培养24h后，用PBS洗细胞2次，加细胞裂解液裂解细胞，30min后再超声裂解4次，4℃12000g离心15min.用Log/

7、g).　　1.2.3两种基因mRNA表达的检测按试剂说明，常规方法提取细胞总RNA，检测总RNA的纯度和完整性.用RTPCR方法检测各基因的mRNA表达量.LXRα上游引物：TCCCACGGATGCTAATG，下游引物：TCCCAGGAATGTTTGCC.ANGPTL3上游引物：TCCAGAACACCCAGAAGTAAC，下游引物：CCAGCCTCCTGAATAACCCT.βActin上游引物：TCCTCCCTGGAGAAGAGCTA，下游引物：TCAGGAGGAGCAATGATCTTG..PCR反应条件为：94℃预变性4mi

8、n后进行94℃30s，55℃30s，72℃1min，共35个循环，72℃延伸10min.取各基因扩增产物6μL用于25g/L琼脂糖电泳，溴化乙啶染色后采集图像,用ANGPTLl3，LXRα与βActin面积灰度值的比值表示各基因mRNA的表达量.