枸杞多糖与黄芪注射液对原代培养的大鼠嗅鞘细胞增殖的影响

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1、分类号：单位代码：10752密级：公开学号：2009069宁夏医科大学硕士研究生学位论文枸杞多糖与黄芪注射液对原代培养的大鼠嗅鞘细胞增殖的影响TheEffectontheProliferationofRats’OlfactoryEnsheathingCellsthatPrimaryCulturedinVariousConcentrationsLyciumBararumPolysaccharidesandAstragalusInjection学位申请人：李瑞指导教师：何仲义教授申请学位门类级别：医学专业名称：人体解剖与组织胚胎学研究方向：周围神经损伤与修复

2、所在学院：基础医学院论文完成日期：二零一三年四月宁夏医科大学研究生学院NingxiaMedicalUniversityThesisforApplicationofMaster’sDegreeTheEffectontheProliferationofRats’OlfactoryEnsheathingCellsthatPrimaryCulturedinVariousConcentrationsLyciumBararumPolysaccharidesandAstragalusInjectionStudent’sname:LiRuiSupervior:Prof.

3、HeZhongyiSubjectCategory:MedicineMajor:HumanAnatomyandHistoloryEmbryologySpeialty:NerveInjuryandRecoveryCollege:CollegeofBasicMedicalScienceCompletetion:April2013宁夏医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究

4、做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学关于学位论文使用授权的声明宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文，同意学校按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权宁夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月

5、日年月日宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要摘要一大鼠嗅鞘细胞原代培养纯化及鉴定目的探讨大鼠嗅球源性嗅鞘细胞的培养纯化、鉴定方法以及纯化后嗅鞘细胞的浓度。方法本实验采用Nash差速贴壁法对原代培养的大鼠嗅鞘细胞进行纯化。鉴定时使用嗅鞘细胞膜表面特异性受体——低亲和力神经生长因子受体p75确定嗅鞘细胞的数量，使用DAPI标记所有细胞的细胞核确定细胞总数，两者的比值即为纯化后嗅鞘细胞的纯度，用百分比表示。结果成熟的嗅鞘细胞贴壁生长，呈现两极和三极形态，胞体折光度强，圆润，轴突细长，初始临近细胞交织成网状，7天后，双极细胞成为主体细胞，生长呈现顺势方向。纯化

6、后，显微镜下观察到嗅鞘细胞形态样细胞占大多数，免疫荧光染色后计数，嗅鞘细胞纯度可以达65%以上。结论原代培养的嗅鞘细胞可以通过Nash差速贴壁的方法进行纯化。纯化后的嗅鞘细胞纯度为65%以上。关键词嗅鞘细胞，纯化，鉴定I宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要摘要二枸杞多糖与黄芪注射液对嗅鞘细胞增殖的影响目的探讨枸杞多糖与黄芪注射液对嗅鞘细胞的增殖作用；研究不同浓度枸杞多糖与黄芪注射液对大鼠源性嗅鞘细胞体外增殖时的最佳浓度。方法嗅鞘细胞经Nash法纯化后，根据检测指标的需要种到孔板中。实验分空白对照组及8个实验组，O组是空白对照组，为无血清培养基，A、B、

7、C、D组是枸杞多糖组，枸杞多糖浓度分别是：A组20μg/ml，B组50μg/ml，C组100μg/ml，D组200μg/ml；E、F、G、H组是黄芪注射液组，黄芪注射液浓度分别是：E组0.05g/ml，F组0.1g/ml，G组0.2g/ml，H组0.5g/ml。将干预后的细胞经过处理后分别进行荧光染色标记，流式细胞仪检测，CCK-8检测，干预后嗅鞘细胞培养上清液进行酶联免疫吸附法检测NGF和BDNF含量（用吸光度值表示）。各组数据采用SPSS18.0软件进行处理，以均数±标准差(x±s)表示。对于正态分布的数据，组间均数比较采用单因素方差分析检验；对于非

8、正态分布数据，组间均数比较采用Kruskal-WallisH检验。P<0.05，