大鼠嗅鞘细胞与人脐带间充质干细胞混合培养的研究

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1、万方数据目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯¨3符号说明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯¨5前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6日U舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·21讨

2、论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·25结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·32附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·40综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯-45致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·56原创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”57万方

3、数据泰山医学院硕士学位论文大鼠嗅鞘细胞与人脐带问充质干细胞混合培养的研究研究生：韩鹏专业：外科学导师：魏开斌教授中文摘要IIIIllIIIIlllll

4、llIIIIIIIllllY2722578目的观察大鼠嗅鞘细胞(olfactoryensheathingcells，OECs)和人脐带问充质干细胞(humanumbilicalcord．mesenchymalstemcells，hUC．MSCs)在体外环境中混合培养一段时间后细胞存活、增殖及人脐带问充质干细胞向神经样细胞分化的影响；描述人脐带问充质干细胞诱导后巢蛋白(nestin)

5、、髓磷脂碱性蛋白(myelinbasicprotein，MBP)与高分子量神经丝蛋白(highmolecularweightneurofilament，NF—H)表达情况，并探讨OECs促进hUC—MSCs向神经方向分化的可能机制。方法1．取出成年wistar大鼠嗅球，对嗅鞘细胞进行原代培养和纯化，并进行鉴定；取剖宫产胎儿脐带，原代培养HUC—MSCs，并通过流式细胞仪鉴定细胞。2．实验分组：大鼠嗅鞘细胞与人脐带问充质干细胞混合培养组为实验组，即A组；阳性对照组分为，单一人脐带问充质干细胞培养组为B1组，单一嗅鞘细胞培养组为B2组

6、；DMEM培养液为C组，即阴性对照组。(1)混合培养后细胞生长状态的观察。分别选取l天，3天，7天，14天时间点显微镜下观察各组细胞的生长状态及排异反应。(2)混合培养后细胞增值活力的检测。选取培养3天的各组细胞，行M盯法检测两种细胞混合培养后的细胞增殖活力。实验中，将A组，Bl组，B2组的细胞分别以5x103／ml接种到96孔板中，每组细胞接种8个孔，只加入培养液的为阴性对照组(边缘孔用无菌PBS填充)。5％C02，37"C孵育48小时后，加入CCK-8溶液，恒温箱中继续培养1—4小时。最后在酶联免疫检测仪A490nm处测量各孔

7、的吸光度OD值，并计算增值率。实验所测数据以(X4-s)表示，采用t检验方法对各组间均数进行比较，所有数据均经SPSSl6．0软件处理。(3)混合培养后脐带问充质干细胞诱导分化表达nestin，MBP，NF—H3种蛋万方数据泰山医学院硕士学位论文白的检测。选择第3天、7天、14天3个时间点倒置相差显微镜下观察细胞生长和分化情况：选取每组3个时问段部分细胞行细胞免疫荧光检测脐带问充质干细胞nestin，MBP，NF—H表达情况，并采集照片，采集5个非重复视野下蛋白表达阳性的细胞数与细胞总数，计算蛋白阳性细胞所占百分比。(4)细胞混合

8、培养后细胞nestin，MBP，NF～HmRNA的表达情况。提取3天，7天，14天3个时间点细胞的RNA，行荧光定量PCR术，检测人脐带间充质干细胞巢蛋白(nestin)、髓磷脂碱性蛋白(ⅧP)与高分子量神经丝蛋白(NF—H)各个时间点的表达情况。结果1．大鼠嗅鞘细胞(OECs)和人脐带间充质干细胞(HUC—MSCs)原代培养及纯化后，可获得纯度90％以上的细胞。2．混合培养后细胞生长状态良好，细胞增殖旺盛，两种细胞混合培养未出现排异反应。3。MTT法结果显示，混合培养组OD值明显高于单一细胞组OD值，差异有显著统计学意义(尺0．

9、01)。4．细胞免疫荧光染色显示：实验组(A组)和阳性对照组(B组)可见阳性染色细胞，A组阳性染色细胞百分率较B组染色阳性细胞百分率要高，差异有统计学意义(P<0．01)：C组未见到nestin，MBP，NF．H蛋白阳性染色细胞。5．荧光定量PCR