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时间:2019-11-30
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1、声明1.本PPT由《脐带间充质干细胞对CIA大鼠炎症因子的干预》一文改编。2.本PPT所涉及资料和图象均仅用于学习参考,不得用于商业目的或其它目的。3.若使用本PPT所涉及资料和图象,应向相关拥有知识产权使用权的网站购买,并标明出处。脐带间充质干细胞对CIA大鼠炎症因子的干预演讲者:blueappleboy脐带间充质干细胞对CIA大鼠炎症因子的干预背景:脐带间充质干细胞可表达多种胚胎干细胞的特有分子标志,具有分化潜力大、增殖能力强、免疫原性低等特征。目的:观察脐带间充质干细胞对类风湿性关节炎免疫炎性的病理过程的干预作用。
2、方法:实验分为3组,建立Ⅱ型胶原诱导的类风湿性关节炎模型大鼠,脐带间充质干细胞组于造模后第4周经大鼠尾静脉注射脐带间充质干细胞,模型组注射生理盐水。引言类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis,RA)时白细胞介素1、白细胞介素6、白细胞介素18、肿瘤坏死因子a(tumornecrosisfactor-a,TNF-a)等炎症因子相互作用形成了一个细胞因子网络。其主要功能是促进B细胞增殖与分化,促进类风湿因子的合成,促进肝细胞合成急性期蛋白,从而增强炎症过程,加重关节病变。它们亦可直接损伤内皮细胞,激活血小板,
3、影响纤溶系统等,同时诱导内皮细胞、白细胞等合成释放各种炎症递质、黏附分子扩大炎症反应,加重免疫炎性血管和关节损伤,促进血液呈高凝性改变。脐带间充质干细胞(umbilicalcordmesenchymalstemcells,Uc-MSC)表达多种胚胎干细胞的特有分子标志,具有分化潜力大、增殖能力强、免疫原性低、取材方便、不受道德伦理限制等特征受到临床关注。课题以CIA大鼠为观察对象,探讨RA炎症黏附因子水平变化及Uc-MSC对其的干预作用。材料和方法设计:随机对照动物实验。时间及地点:实验于2009-09/2010-06在
4、扬州大学医学院完成。材料:雌性近交系SD大鼠30只,清洁级,4~6周龄,体质量为(162±20)g,购于南京医科大学实验动物中心。主要试剂试剂及仪器来源鸡Ⅱ型胶原Sigma公司冰乙酸(分析纯)中国恒利试剂厂L-DMEM、胎牛血清、胰蛋白酶美国Gibco公司大鼠白细胞介素1、大鼠白细胞美国RD公司介素6、大鼠白细胞介素18ELISA试剂盒、大鼠TNF-aELISA试剂盒、大鼠血管细胞黏附分子1(vascularcelladhesionmolecule-1,VCAM-1)ELISA试剂盒、FITCMouseAnti-RatC
5、D11b、FITCMouselgA实验方法Uc-MSC的制备:将人的脐带剪成组织块后贴壁培养72h,去除未消化的组织块,将原代脐带间充质干细胞用胰蛋白酶消化后加入含有体积分数10%胎牛血清的L-DMEM培养基终止消化,反复吹打,移入离心管中离心10min后,去掉上清液,加入培养基后吹打,移入培养瓶中,37℃、体积分数5%CO2培养箱中培养,至第3代消化、离心后用生理盐水将Uc-MSC细胞浓度调至2×109L-1,4℃保存备用。CIA大鼠模型建立:雌性近交系SD大鼠,随机分为正常组(见图1a)、模型组(见图1b)、Uc-M
6、SC组,每组10只。制备0.01mol/L乙酸溶液中溶解的鸡源性Ⅱ型胶原(质量浓度为5g/L),充分溶解后与完全弗氏佐剂(CFA)等体积混合,并充分乳化成Ⅱ型胶原乳剂。予20只大鼠右后足跖皮内注以0.1mL免疫大鼠,第21天时再次以每只0.1mL的剂量同部位皮内多点激发注射免疫大鼠,建立Ⅱ型胶原诱导的类风湿性关节炎大鼠模型。各组大鼠处理:取Uc-MSC2×109L-1,于造模后第4周Uc-MSC组经大鼠尾静脉注射,模型组注射生理盐水0.5mL。Uc-MSC表型鉴定:采用流式细胞术对CD14、CD34、CD44、CD45、
7、CD73、CD90、CD105及HLA-DR表面标记进行表型分析,其中CD44、CD73、CD90和CD105阳性,阳性率>95%;CD14、CD34、CD45和HLA-DR阴性,阳性率<2%,确认为Uc-MSC细胞。指标检测:模型组和Uc-MSC组分别于第7天及第35天每组各取5只大鼠麻醉,于腹主静脉取血5mL,分别置肝素抗凝管和血清管中,检测中性粒细胞表面CD11b(FCM法)和血清白细胞介素1、白细胞介素6、白细胞介素18、TNF-a、VCAM-1水平(ELISA法)。流式细胞术检测各组大鼠中性粒细胞表面CD11b
8、MFI表达。主要观察指标:①各组大鼠血清白细胞介素1、白细胞介素6、白细胞介素18、TNF-a、VCAM-1水平。②各组大鼠中性粒细胞CD11b的表达水平。③各组大鼠中性粒细胞表面CD11bMFI表达。统计学分析:采用SPSS10.0及Excel2003统计学软件完成。组间比较采用方差分析,P<0.05为差异有显著性
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