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1、嗅鞘细胞分离培养嗅鞘细胞分离有传统分离法:1.显微解剖分离嗅球；2.嗅球置于少量ACSF（人工脑脊液）屮（4°C冰浴），在解剖显微镜下，将位于嗅球最外层的嗅神经层、嗅神经及包被的脑膜轻轻剥下，用ACSF洗2次；（用ACSF浸泡组织块，常温放置（室温低于26°C吋采用）或4°C放置（室温高于26°C吋采用）不超过2h）3.组织块用ACSF洗涤两遍：向装有组织块的EP管加入lml含2*P/S的ACSF,小心移除ACSF,-再次加入1ml含2*P/S的ACSF,小心彻底移除ACSF；4.加入组织块5倍体积0.125%胰酶（用基础DMEM稀释）
2、，用小剪刀把组织块尽量剪碎，用封口膜封口后，置于37°C水浴锅屮，孵育20min,每隔5min弹匀一次；5•孵育结朿后，立即加入1ML完全培养基（DMEM,10%FBS）,立即混匀，1000g,室温,离心1Omin,小心移除上清；立即加入0.5ML完全培养基（DMEM,IO%FBS）重悬细胞及组织，吹打12下，把细胞及组织悬液放置于24孔板屮，补加培养基至总体积为1.5ml。分层消化法:1.显微解剖分离嗅球；（用ACSF浸泡组织块，常温放置（室温低于26°C时采用）或4°C放置（室温高于26°C吋采用）不超过2h）2.嗅球用ACSF洗涤
3、两遍：向装有嗅球的EP管加入lml含2*P/S的ACSF,小心移除ACSF,再次加入lml含2*P/S的ACSF,小心彻底移除ACSF；1.加入组织块5倍体积0.125%胰稱（用基础DMEM稀释），置于37°C水浴锅屮,孵育15min,每隔5min弹匀一次，移出含有细胞的酶液，立即加入1ML完全培养基（DMEM,10%FBS）,立即混匀，lOOOg,室温,离心lOmin,小心移除上清；立即加入0.5ML完全培养基（DMEM,10%FBS）重悬细胞，吹打6下，把细胞悬液放置于24孔板屮，补加培养基至总体积为1.5mlo2.剩余的嗅球再用酶
4、消化，重复以上操作（第3步）6次，细胞悬液分别收集于6支小试管内备用。直接挤压法:1.显微解剖分离嗅球；（用ACSF浸泡组织块，常温放置（室温低于26°C时采用）或4°C放置（室温高于26°C时采用）不超过2h）2.嗅球用ACSF洗涤两遍：向装有嗅球的EP管加入1ml含2*P/S的ACSF,小心移除ACSF,再次加入lml含2*P/S的ACSF,小心彻底移除ACSF；3.嗅球置于2倍体积ACSF屮，用眼科银子直接将嗅球撕烂、挤压，将剩余的片状组织块转移至另一试管内（用锡子移取货离心除上清），用ACSF洗2次（用锡子移取货离心除上清）；3
5、.加入组织块5倍体积0.125%胰酶（用基础DMEM稀释），用小剪刀把组织块尽量剪碎，用封口膜封口后，置于37°C水浴锅屮，孵育20min,每隔5min弹匀一次；4•孵育结束后，立即加入1ML完全培养基（DMEM,10%FBS）,立即混匀，1000g,室温,离心lOmin,小心移除上清;立即加入0.5ML完全培养基（DMEM,10%FBS）重悬细胞及组织，吹打12下，把细胞及组织悬液放置于24孔板屮，补加培养基至总体积为l.5mlo
