不同培养条件人嗅黏膜嗅鞘细胞生长情况比较-论文.pdf

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1、·1366·浙江临床医学2014年9月第16卷第9期不同培养条件人嗅黏膜嗅鞘细胞生长情况比较郭鑫张辰马思源吴卫江★【摘要】目的研究鼻黏膜嗅鞘细胞在不同条件尤其在正常脑脊液中的生长情况，以利于实施自体嗅鞘细胞移植。方法设置5种不同培养条件进行比较，了解脑脊液培养条件下细胞的贴壁、增殖、形态学及细胞纯度的变化。结果普通培养基培养一周后改用脑脊液培养对细胞的增殖能力不造成很大影响，细胞形态及纯度也无明显变化。结论使用脑脊液培养作为自体细胞移植前的过渡将规避伦理学风险，临床是可行的。【关键词】脑脊液嗅鞘细胞体外培养【Abstract】ohiectiveStu

2、dyofgrowthofnasalmucosaOECSinthenormalCSFwillbeusefulforcarryingoutclinicstudyofOECSautotransplantation．Methods5differentcultureconditionswerecomparedtofindoutthechangeofOECSadherence，proliferation，morphologyandpurit)rundertheCSFculturecondition．ResultsThecultureturningcommonme

3、diumintoCSFafter1CSFafter1weekdidn’tcausesignificantinfluenceofcellsproliferationability．Theirmorphologyandpuritydidn’texperiencemuchchange，either．ConclusionAsamethodofpassingover，usingCSFculturebeforeOECSautotransplantationwillavoidethicalrisk，whichwillbefeasibleinclinic．【Keyw

4、ords】CerebrospinalfluidOlfactoryensheathingcellsInvitroculture嗅鞘细胞是近年来被发现具有特殊功能的神经胶盛有2．4U／ml的中性蛋白酶Ⅱ的玻璃瓶中，在37水质细胞，兼具星形胶质细胞和施万细胞双重特性。嗅育箱中孵育45rain，DMEM／F12冲洗3遍，放置盛有鞘细胞分布于嗅球和鼻腔嗅黏膜，已证明二者的嗅鞘DMEM／F12的培养皿内，解剖显微镜下剥离嗅黏膜固细胞形态学特征与免疫细胞化学性质基本一致，均具有层，剪刀剪碎至大约0．2mm小块，细管吹打至浑浊有促进中枢神经系统轴突再生的作用⋯1。R

5、ichter[2，3]加0．125％胰酶4ml，在37℃CO，培养箱中消化15min等的研究表明嗅黏膜来源的嗅鞘细胞对中枢神经系统左右，然后用含10％胎牛血清的DMEM／F12培养液具有更强的修复作用。嗅黏膜在取材上有着方便、快4ml终止消化，4℃、800r／rain离心10min去除上清液捷和安全的特点，更易于临床的应用。本实验通过使后，加全培养液(DMEM／F12+10％胎牛血清)15m1种用5种不同培养条件对成人鼻腔嗅黏膜进行培养，目植于无多聚赖氨酸包被处理的培养皿，于37℃CO培的是了解细胞在正常脑脊液中的生长情况，为自体嗅养箱培养。按改良N

6、ash_4]差速贴壁法，18h后移植鞘细胞移植应用于临床提供依据。于另一个无多聚赖氨酸包被处理的培养皿，36h后加入适量培养液与原培养液}昆匀，对培养液通过记数板1材料与方法记数，调整细胞培养密度为1x10／ml，将细胞悬液重1．1材料选取蝶窦手术中的成人鼻腔嗅黏膜，征得新种植于包被多聚赖氨酸的24孔细胞培养板内(1ml／家属同意，取中鼻甲内侧后1／3的嗅黏膜。孔)，共种植9孔，其中6孔加入全培养液(DMEM／1．2主要试剂和仪器试剂：DMEM／F12培养基F12+10％FBA)，各3孔分别作为第一和第二组，另3(GIBCO／BRL)，FBS(GIB

7、CO／BRL)，青链霉素(GIBCO／孔在全培养液里加入Forskolin和BPE，作为实验的第BRL)，Forskolin(Sigma)，BPE(Sigmao中性蛋白三组。将培养皿中剩余的细胞悬液离心后去上清液，酶II(美国Gibco公司)，胰酶(华美生物)，用于免将细胞集落用无菌毛细吸管大体吸出一半后，加人无疫染色的试剂：鼠抗人P75IgG(SantaCurz)，兔抗人血清D／F12培养基，调整细胞接种密度为lx106／ml，GFAPIgG(Santa．Curz)，单标及双标免疫组化试剂盒，接种于24孑L板内，共3孑L，作为第四组；吸管内的另FI

8、TC结合的兔抗鼠IgG(BOSTER)，TRITC结合的羊一半细胞则加入临床新鲜取材的正常脑脊液中(使用抗兔