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《GFP年轻成年大鼠嗅鞘细胞的分离培养与形态学特征.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、GFP年轻成年大鼠嗅鞘细胞的分离培养与形态学特征张洁元，段朝霞，陈莉发，李兵仓作者简介：张洁元（1982—），女，重庆，本科，助理实验师，主要从事脊髓损伤修复方面研究。电话：023-68757460基金项目：创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室自主研究课题（SKLZZ200803）通讯作者：李兵仓，Tel:023-68757461,E-mail:bcli1118@yahoo.com.第三军医大学大坪医院野战外科研究所六室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室，重庆，400042【摘要】 目的 观察急性体外分离、培养的GFP大鼠OECs的形态学特征与生物学活性，为在体移
2、植示踪研究奠定基础。方法 于解剖显微镜下、无菌环境取2.5月龄的GFP大鼠嗅球最外两层，经酶消化法分散后将细胞接种于含20%胎牛血清的DMEM/F12培养基中。采用差速贴壁和阿糖胞苷抑制相结合的方法纯化，定期进行形态学观察并摄片。在培养第10d进行S-100和NGFRp75的免疫细胞化学染色鉴定，并计算OECs的纯度。结果 培养的GFP大鼠OECs在荧光倒置显微镜下呈绿色强荧光，形态以双极、多突起形为主，呈S-100、NGFRp75阳性，纯度在95%以上。结论 利用差速贴壁和阿糖胞苷化学抑制相结合的方法可分离出高纯度的GFP-OEC，其形态学特征与生物学活性
3、与普通OECs相同。【关键词】 GFP大鼠；嗅鞘细胞；细胞培养；免疫细胞化学【中图分类号】R322.81【文献标识码】AIsolated、CultureandMorphologiccharacteristicsofOlfactoryEnsheathingCellsfromGFPYoungAdultRatZHANGJie-yuan,DUANZhao-xia,CHENLi-fa,LIBing-cangDepartment6ofResearchInstituteofSurgery,DapingHospital.ThirdMilitaryMedicalUnivers
4、ity,StateKeyLaboratoryofTrauma,BurnsandCombinedInjury,ChongQing,400042,China.【Abstract】 Objective ToobservethemorphologiccharacteristicsandbiologicalactivityoftheOECsfromGFPratbyinvitroacuteisolation,incubation,andtolaythefoundationfortheresearchontrackingcelltransplantation.Method
5、s TheOECsweredissociatedfromthefirsttwoouterlayersoftheolfactorybulbsoftheyoungadultGFPrat(2.5monthsold)underanatomicalmicroscopebythemethodofenzymaticdigestion,culturedinDMEM/F12mediumwith20%foetalcalfserum,andpurifiedbythemethodofcombiningthedifferentratesofcellatadhesionwiththeA
6、ra-Cinhibitionofcell.ThemorphologicalchangesofculturedOECswereregularlyobservedandphotographs.On10thcultureday,theOECsinculturewereidentifiedbytheimmunocytochemistrytechniqueofS-100andNGFRp75,andthepurityofthepositivecellswascalculated.Results TheculturedOECsweregreenhyperfluoresce
7、nceobservedinfluorescentinvertedmicroscope,presentedmainmorphologicaltypes:bipolar,process-bearingmultipolar.Morethan95%culturedcellswereidentifiedtobeOECs,whichexpressedS-100andNGFRp75.Conclusion ThehighpurityGFP-OECswhichcanbeculturedsuccessfullyinvitrobythecombinedpurificationme
8、thod,havethesamemorphologi
