枸杞多糖对精原干细胞体外增殖的影响

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1、分类号：R6单位代码：10752密级：公开学号：2009189宁夏医科大学硕士研究生学位论文枸杞多糖对精原干细胞体外增殖的影响Influenceoflyciumbarbarumpolysaccharidesonproliferationofspermatogonialstemcellsinvitro学位申请人：邱志军指导教师：马良宏副教授申请学位门类级别：医学专业名称：外科学研究方向：男性不育的应用基础研究所在学院：临床医学院论文完成日期：二○一二年四月宁夏医科大学研究生学院NingxiaMedicalUniversityThesisforApplic

2、ationofMaster’sDegreeInfluenceoflyciumbarbarumpolysaccharidesonproliferationofspermatogonialstemcellsinvitroStudent’sName:QiuZhijunSupervisor：MaLianghongAssociateProfessorSubjectCategory:MedicineMajor:SurgerySpecialty:BasicApplicationResearchonMaleInfertilitySchool:DepartmentofC

3、linicalMedicineCompletionDate:Apr.2012宁夏医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学关于学位论文使用授权的声明宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文，同意学校按规定

4、向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权宁夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要枸杞多糖对精原干细胞体外增殖的影响摘要背景：随着男性不育的逐年增加，精原干细胞研究在男性生殖健康领域展现出广阔的应用前景，采用精原干细胞移植的方法来治疗非梗阻性无精子症具有潜在的临床应用价值，尤其给

5、青春期前接受大剂量化疗或放疗所致不育的患者及其家庭带来了希望。建立有效的精原干细胞体外培养方法，获得数量足够、纯度较高的精原干细胞是进行精原干细胞有效移植的基础，精原干细胞的体外增殖培养仍是精原干细胞研究中的热点之一。尽管近些年来对精原干细胞体外培养方法的研究取得了一些进展，但至今仍然未建立一种简单有效的体外培养方法。因此，如何建立一种迅速、有效的精原干细胞体外培养方法仍是目前精原干细胞研究中亟待解决的问题之一。目的：探讨枸杞多糖对精原干细胞体外增殖培养效果的影响。方法：取出生后4～6d的雄性C57BL/6小鼠，采用机械分离与两步酶消化法从睾丸组织中获

6、取Sertoli细胞与精原干细胞，建立Sertoli细胞饲养层，将精原干细胞接种在Sertoli细胞饲养层上体外共培养，并将枸杞多糖（LBP）及细胞因子按实验分组要求分别添加到细胞培养液中。按照培养液不同实验分为3组，A组：培养液为DMEM/F12－C，B组：DMEM/F12－C培养液+100ug/mlLBP，C组：DMEM/F12－C培养液+100ug/mlLBP+10ng/ml胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）+1000U/ml白血病抑制因子（LIF）。细胞原代培养一周后，以流式细胞仪检测细胞活性率及细胞周期，并以GFRa-1、Thy-1、c-k

7、it作为标志物，分别检测各组精原干细胞的阳性表达率。结果：通过流式细胞仪检测细胞活性率，采用SPSS11.5统计软件进行t检验和单因素方差分析，A组为（63.42±4.24）%，B组为（87.16±0.88）%，C组为（97.27±1.59）%,各组间差异有统计学意义(均P<0.05)；以流式细胞仪I宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要检测细胞周期，A组S期细胞为（11.61±0.99）%，B组为（16.38±0.78）%，C组为（16.59±0.74）%,A组较B组及C组低，差异有统计学意义(均P<0.05)，但B组与C组间差异无统计学意义（P＞0

8、.05）。以GFRa-1为标志物检测各组精原干细胞阳性率，A组为（6.43±1.63）%，B组