大鼠骨髓源性内皮祖细胞（epcs）体外培养对人脐静脉内皮细胞（huvec）增殖的影响及黄芪多糖（aps）干预的研究

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1、巧影责阳中＆学给ｃｒ＇一顾女擎巧沦义膨学号：２０１２２１０研究生姓名：陈永华Ｊ指导教师：徐寒松教授＞备床：专业中西医结合１二〇—五年五月答辩时间：分类号密级ＵＤＣ１０６６２学校代码学位论文大鼠骨髓源性内皮祖细胞（ＥＰＣｓ）体外培养对人脫静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）増殖的影晌及黄读多糖（ＡＰＳ）干预的研究８１２６０６００）（国家自然基金资助课题项目编号：陈永华指导老师姓名；徐寒松教授申请学位级别：中西民结合临床：極±专业名務２０巧年０４月论文答辩日期２０巧年０５月论文提交日期：：学

2、位授予单位和日期：贵阳中侯学院２０１５年０６月答辩委员会主席：凌湘力教榜贵阳中医学院硕±学位论文贵阳中医学院硕±学位论文相关声明原创性声明本文声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表论文中撰写过的研究成果，也不包含为获得贵阳中医学院或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确说明。ｒ■作者：曰期：年少月《曰关于学位论文使用授权说明本文了解贵阳中医学院有关保留、使用学化论文的规

3、定：，即学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可Ｗ公布学位论文的全部或部分内容，可Ｗ采用复印、缩印或其他手段保存学位论文；学校可根据国家或贵州省有关部口规定送交学位论文。？＞作者签名；导师签名：曰期；少超月曰（Ｐ贵阳中医学院硕±学位论文目录０Ｓ１中；３；摘要２Ｅｎｌｉｓｈａｂｓｔｒａｃｔ５ｇ１０前胃蚊１３１实验材料１３１．１实验仪器１３１．２实验试剂１４１．３实验药物的Ｋ制１６１．４实验液体的配制１６１．５实验动物１７２实验方法与结果１７２．Ｉ１７实

4、验方法２２２５．实验结果３实验讨论与结论４５３．１实验讨论４５３．２巧验结论５１总结与賠维５２参考文献５３一附录缩略语表日９附录二综述６１附录Ｈ致谢７４７５附录凹个人简历Ｉ贵阳中医学院硕±学位论文中文摘要ＡＰｏｉＳ目的：１．观察黄茂多糖（ｓｔｒａｇａｌｕｓｌｙｓａｃｃｈａｒｄｅｓ，ＡＰ）体外干预培养对大鼠骨髓源性内皮祖细胞（ＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌＰｒｏｇｅｎｉｔｏｒＣｅｌｌｓ，ＥＰＣｓ）数量、迁移、黏附、增殖、周期分布及分化的影响。２．观察ＡＰＳ体外干预大鼠骨髓源性ＥＰＣｓ共培养对人巧

5、静脉内皮细胞（ＨｕｍａｎＵｍｂｉｌｉｃａｌＶｅｉｎＥｌｎｄｏｔｈｅｌｉａｌＣｅｌｌｓ，ＨＵＶＥＣ）増殖的影响。１Ｗｉ方法．ｓｔａｒ大鼠予Ｗ水合氯醒腹腔注射麻醉，：取雄性脱颈处死，将其股骨、ＰＢＳ腔骨、胸骨、化骨取出，用缓冲液冲洗骨髓腔，采用密度梯度离也法分离大鼠骨髓源性单个核细胞，培养７天Ｗ后收集贴壁细胞。采用多波长激光共聚焦显微镜对贴壁细胞进行鉴定，采用流式细胞术检测贴壁细胞的表型。收集大鼠骨髓源性ＥＰＣｓ，将其随机分为６组：设立对照组；其他组为ＡＰＳ各浓度组（共日组），于ＤＭＥＭ（低糖）培养基中加入终浓度为０．０５ｍｇ／ｍｌ、Ｏ．ｌｍｇ／ｍｌ、

6、０．２ｍｇ／ｍｌ、０．４ｍｇ／ｍｌ、０．８ｍｇ／ｍｌ的ＡＰＳ培养２４ｈ，其中ＡＰＳ浓度为０．４ｍｇ／ｍｌ组予Ｗ不同时间（Ｏｈ、化、１化、２４ｈ、４８ｈ）进行培养。倒置显微镜观察每組大鼠骨髓源性ＥＰＣｓ并进行计数；Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室培养检测大鼠骨髓源性卧Ｃｓ的迁移数量；黏附能力实验检测大鼠骨髓源性ＥＰＣｓ的黏附数量；ＭＴＴ增煎实验检测大鼠骨髓源性ＥＰＣｓ的増巧；流式细胞术检测大鼠骨髓源性ＥＰＣｓ的细胞周期的分布和分化。２．分离培养大鼠骨髓源性ＥＰＣｓ，７天后收集贴壁细胞，取样进行染色和流式鉴定Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ，待细胞表达符合标准后，建立共巧养体系

7、，设立对照组，将大鼠骨髓源性ＥＰＣｓ与ＨＵＶＥＣ予ＷＤＭＥＭ（低糖）培养基共培养，并予ＷＡＰＳ各浓度（０．０５ｍｇ／ｍｌ、０．Ｉｍｇ／ｍｌ、０．２ｍｇ／ｍｌ、０．４ｍｇ／ｍｌ、０．８ｍｇ／ｍｌ）干预共培养２地ＭＴＴＡＰＳＳ后，増殖实验检测各浓度干预共培养后酣ＶＥＣ的增殖中ＡＰ；其浓度为０．４ｍｇ／ｍｌ组予Ｗ干预共培养不同时间（Ｏｈ、化、１２ｈ、２地、４８ｈ），ＭＴＴ増殖实验检测共培养各时间点ＨＵＶＥＣ的増殖