重症急性胰腺炎大鼠tnf

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1、重症急性胰腺炎大鼠TNF【摘要】目的通过重症急性胰腺炎大鼠探讨TNF-α和细胞间粘附分子-1（ICAM-1）对本疾病的影响。方法20只SD雄性大鼠分2组，每组10只。普通SAP组以5%牛磺胆酸钠建立重症急性胰腺炎（SAP）；病因加重组以10%牛磺胆酸钠制模。制模10h后处死大鼠，检测其血液生化和细胞因子浓度，观察组织脏器的病理变化及组织TNF-α和ICAM-1的表达。结果病因加重组大鼠血清的谷丙转氨酶、肌酐和TNF-α与普通SAP组相比有明显升高。同时，该组大鼠的肝脏、肺和肾脏病理评分显著大于普通SAP组。并且其脏器组织中TNF-α表达和ICAM-1的表达

2、也明显增加。结论TNF-α及ICAM-1可能在胰腺炎重症化及MODS发生发展过程中起重要作用。【关键词】重症急性胰腺炎；肿瘤坏死因子α；细胞间粘附分子-1【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheexpressionandsignificanceofTNF-αandICAM-1onorganfunctionofsevereacutepancreatitisbyestablishinganimalmodelsofthedisease.MethodsTtaurocholateintothepancreaticductassereve

3、acutepancreatitis(SAP)model.TheratsingroupBtaurocholateintothepancreaticduct.Thechangesinorganfunctionsistryandpathologicalexaminationade10hourslateraftermodeling,andtheexpressionofTNF-αandICAM-1inpancreasandotherorgansinedbyimmunohistochemistry.ResultsThesevereorganpathologicalle

4、sionayplayanimportantroleintheorgandysfunctioninsevereacutepancreatitis.【Keyann［1］认为严重的胰腺坏死正是导致脏器功能早期发生障碍和衰竭的重要因素。胰腺组织受损激活单核-巨噬细胞系统的炎症反应，合成和释放多种促炎因子如TNF-α、白介素-1等，从而刺激粒细胞活化，激活毛细血管内皮因子，启动炎症反应，诱发全身炎症反应综合征(systemicinflammatoryresponsesyndrome,SIRS)。本研究旨在通过动物实验探讨TNF-α和ICAM-1对SAP的影响。1材料

5、与方法1.1材料雄性SD大鼠20只，体重300～400g，购自中科院上海分院实验动物部。牛磺胆酸钠（纯度99%），购自Sigma公司，用生理盐水配制成5％和10％牛磺胆酸钠溶液。谷丙转氨酶及肌酐测定试剂盒，购自上海生物制品研究所。α-淀粉酶试剂盒，购自上海科华-东菱诊断用品公司。大鼠TNF-αkit:，购自Biosource公司。TNF-α和ICAM-1一抗，购自SantaCruz。抗山羊二抗，购自华美生物工程公司。主要仪器包括低温高速离心机（Beckman公司）、uQuant酶标仪（BIO-TEK公司）、DU640分光光度计（Beckman公司）、CHK

6、2-F-GS光学显微镜（Olympus公司）、BX50病理摄片仪（Olympus公司）。1.2方法1.2.1实验模型制备和分组20只大鼠随机分成两组，每组10只。实验前12h禁食，自由饮水。动物以乙醚吸入麻醉，正中切口进腹，找到胰胆管。于胰胆管远端用无损伤金属夹将其夹闭，近端注射5%牛磺胆酸钠，剂量为1ml/kg体重，为普通SAP组。注射时间均为60s，匀速推完，保持5min后拔出穿刺针，去除金属夹。缝合腹壁各层。加重病因组用10%牛磺胆酸钠，剂量为1.5ml/kg体重。1.2.2标本采制和检测制模后10h，两组大鼠经腹主动脉采血，血液4℃过夜，3000r

7、pm4℃离心15min后取血清，-20℃保存。肝功能检查测谷丙转氨酶（ALT），肾功能检查测肌酐（CRE）。ALT、CRE、TNF-α以及淀粉酶的测定均按试剂盒说明进行。取胰腺、肝脏、肾脏和肺组织各1块。离体组织福尔马林固定，72h后石蜡包埋,常规切片和HE染色，按胰腺、肝脏、肾脏和肺组织的病理学评分标准［2～5］得出病理学评分。两组分别取肝脏、肾脏、胰腺、肺脏组织切片1张，以免疫组织化学技术（DBA法）检测TNF-α及ICAM-1的表达。1.3统计学处理计量指标结果用均数±标准差表示，用SAS软件包行t检验。2结果2.1大体观察实验制模10h内无大鼠死亡

8、。制模后10h处死动物时发现普通SAP组大鼠有中等量腹水和大网膜上