重症急性胰腺炎大鼠il

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1、重症急性胰腺炎大鼠IL作者：金牡丹周智林傅志泉【摘要】　　目的通过观察重症急性胰腺炎（SAP）大鼠白介素-8（IL-8）、白介素-10（IL-10）及胰腺NF-κB的表达，探讨重症急性胰腺炎的发生发展机制。方法将40只大鼠随机分为正常对照组（假手术组）、模型组（重症急性胰腺炎组），每组20只，造模后24h测定血淀粉酶、IL-8及IL-10，切取相同部位的胰腺组织观察组织病理学改变，进行NF-κB的免疫组织化学染色。结果模型组大鼠血清淀粉酶、IL-8及IL-10的浓度均显著高于对照组，模型组NF-κB免疫组化染色较对照组显著增强。结论IL-8、IL-10及NF-

2、κB在重症急性胰腺炎的发生发展中起重要作用，重症急性胰腺炎的早期即有胰腺组织NF-κB的活化。【关键词】重症急性胰腺炎白介素-8白介素-10核因子-κB　　【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheexpressionofnuclearfactor-kappaB(NF-кB),seruminterleukin-8(IL-8)andinterleukin-10(IL-10)insevereacutepancreatitis(SAP)inrats.Andtoinvestigatetherolesofactivatednuclearfac

3、tor-kappaB(NF-κB)andserumIL-8andIL-10inSAP.Methods40ODS）或者多器官功能衰竭（multipleorganfailure,MOF）是SAP的主要死亡原因。损伤因子（如异常激活的胰酶）导致各种炎症细胞的过度激活，形成亢进的免疫反应，并释放多种炎性介质，启动全身炎症反应综合征（systemicinflammatoryresponsesyndrome,SIRS），在机体受到促炎细胞因子损伤引起SIRS的同时，机体的防御系统也随之发生反应,合成并释放抗炎细胞因子，引起代偿性抗炎反应综合征(pensatoryanti-

4、inflammatoryresponsesyndrome,CARS)［１］。无论失控的SIRS，还是过度的CARS，均表现为机体致炎-抗炎因素的失衡，机体稳态破坏，均可导致炎症损害加重。在SAP时，大量细胞因子产生，促炎因子和抗炎因子共存，其中包括促炎细胞因子IL-8和抗炎细胞因子IL-10［２］。核因子-κB（nuclearfactorkappaB,NF-κB）活化是众多炎症介质作用机制的共同通道，诸多炎症因子在基因水平上都受到NF-κB的调控。作者自2006年8月至2007年3月通过建立大鼠重症急性胰腺炎模型，观察血清中IL-8、IL-10的变化以及胰腺N

5、F-κB的表达，探讨重症急性胰腺炎的形成机制。　　1材料和方法　　1.1动物及分组　　　　40只p;Dsystems。　　1.3重症急性胰腺炎模型的制备　　大鼠术前禁食、不禁水12h，以10%水合氯醛腹腔注射麻醉（300mg/kg）。无菌条件下取上腹正中切口入腹，寻找胆胰管十二指肠乳头开口，使用一次性静脉留置套管针于对系膜缘肠壁穿刺，进入肠腔后即将针芯退出，将套管经乳头部逆行插入胆胰管约1cm，以无损伤小动脉夹于肝门部阻断胆管后，套管末端接微量泵，以0.1ml/min的速度匀速注入5%牛磺胆酸钠（1ml/kg体重），注毕后拔管，胰腺组织可在短时间内出现充血、水

6、肿，可见包膜下胰腺组织点状或小片状出血，5min后去除小动脉夹，以无损伤缝线缝合肠壁穿刺孔处，关腹。对照组大鼠开腹后仅翻动胰腺数次后关腹。　　1.4取材方法　　　　大鼠造模后24h以10%水合氯醛腹腔注射麻醉，固定，经心脏取血，测定血淀粉酶、IL-8及IL-10；切取相同部位的胰腺组织。　　1.5分光光度法检测血清淀粉酶　　1.6血清IL-8及IL-10测定（ELISA法）　　　　洗涤液用重蒸水1:20稀释。底物工作液配制：使用前将OPD片放入底物稀释中溶解，每片加液5ml。标准品液配制：使用前每管中加入蒸馏水200μl溶解。试剂盒设标准孔8孔，每孔中各加入样

7、品稀释液100μl，第1孔加标准品100μl，混匀后用加样器吸出100μl，移至第2孔，如此反复作对倍稀释至第7孔，最后，从第7孔中吸出100μl弃去，使之体积均为100μl，第8孔为空白对照，建立标准曲线。待测品孔各加入待测样品100ml。将反应板充分混匀后置37℃120min。用洗涤液将反应板充分洗涤5次，向滤纸上印干。每孔加第一抗体工作液1滴，将反应板置37℃60min。同前洗板。每孔加酶标抗体工作液2滴，将反应板置37℃60min。同前洗板。每孔加入底物工作液2滴，置37℃暗处反应10min。每孔加入1滴终止液混匀。在492nm处测吸光值。以标准品10

8、00、500、250、125、62、3