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《左旋咪唑对急性eae大鼠脊髓内单个核细胞上cd28和cd4表达的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、左旋咪唑对急性EAE大鼠脊髓内单个核细胞上CD28和CD4表达的影响作者：邱伟文,郑荣远韩钊,卢晔芬,吴赛珍,章圣辉,韩义香【关键词】左旋咪唑;,实验变态反应性脑脊髓炎;,CD28;,CD4;,表达 [摘要]目的:探讨左旋咪唑(Levamisole,LMS)对实验性变态反应性脑脊髓炎(experimentalallergicencephalomyelitis,EAE)大鼠脊髓内单个核细胞上CD28和CD4表达的影响及其意义。方法:采用流式细胞术检测EAE大鼠脊髓单个核细胞上CD28和CD4的表达水平。结果:LM
2、S同时给药组和预处理的EAE组大鼠脊髓内单个核细胞上CD28和CD4的表达水平,均明显高于非LMS处理的EAE模型组。结论:LMS能促进EAE大鼠脊髓内单个核细胞上CD28和CD4的表达,这可能是LMS诱发的炎性脱髓鞘白质脑病发病机制中的一个重要环节。 [关键词]左旋咪唑;实验变态反应性脑脊髓炎;CD28;CD4;表达 左旋咪唑(Levamisole,LMS)为四咪唑的左旋体。1969年,LMS作为广谱驱肠虫药开始使用于临床。1971年,Renoux发现LMS具有增强免疫的作用,其作为免疫增强剂已被推广用于慢
3、性感染、皮肤疾病、自身免疫性疾病及肿瘤等疾病的免疫调节辅助治疗。于1982年LMS开始在我国销售后,临床使用相当广泛,但发现其有许多严重的不良反应,尤其是LMS引起脑炎综合征(或迟发性脑病,急性脱髓鞘白质脑病)已陆续报道了600多例[1]。郑荣远等[2]完成了多项流行病学调查,论证了咪唑类驱虫药与该类脑病的发生有因果关系,发现LMS诱发的炎性脱髓鞘白质脑病的发病率为45.8/10万[3],但其诱发该病的确切机制仍不清楚。实验性变态反应性脑脊髓炎(experimentalallergicencephalomyeli
4、tis,EAE)为CD4+T细胞介导的对髓鞘抗原的自身免疫性疾病,是研究炎性脱髓鞘白质脑病的经典动物模型。我们首次观察到LMS能促进S同时给药组):先经腹腔注射NS（10mL/kg）,2次/d,共7d,再经四足垫皮下注射GPSCHCFA乳剂,0.4mL/只,于第0、24及48h腹腔注射LMS(10mg/kg)。第2组(LMS预处理组):先经腹腔给S（10mg/kg）,2次/d,共7d,再经四足垫皮下注射GPSCHCFA乳剂,共0.4mL/只,于第0、24及48h腹腔注射同量NS。第3组（EAE模型组）:先经腹腔注
5、射NS10mg/kg,2次/日,共7d,再经四足垫皮下注射GPSCHCFA乳剂,共0.4mL/只,于第0、24及48h经腹腔注射同量的NS。第4组（对照组）:先经腹腔给L/只,于第0、24及48h腹腔注射同量的NS。4组动物均在免疫后的当日,经右腹股沟皮下注射百口咳疫苗0.1mL（约1×109菌体）。 1.2.3动物行为改变的观察免疫后每日早晚各观察动物行为的改变1次,并详细记录,同时记录其体质量的变化,于第25天全部处死。 1.2.4大鼠神经功能受损情况观察根据Kono等[4]报道的标准,定为0～5分:无明
6、显异常者为0分,尾巴无力者为1分,轻微后肢无力者为2分,严重后肢麻痹者为3分,四肢麻痹者为4分,死亡者为5分。 1.2.5大鼠脑、脊髓的病理检查将L预冷的GKN液(8g/LNaCl、04g/LKCl、356g/LNa2HPO412H2O、078g/LNaH2PO42H2O、2g/L葡萄糖及2000U/L肝素,pH74)经主动脉灌流至无血液流出时,小心取出脊髓及脑组织。取一小段颈髓及部分脑组织依次经40g/L多聚甲醛固定、石蜡包埋及常规苏木素伊红染色(切片厚5μm)和LuxolFastBlue髓鞘染色(切片厚10
7、μm)后,在光学显微镜下进行病理学检查。 1.2.6脊髓单个核细胞上CD4、CD8及CD28表达的检测按Pope等[5]报道的方法制备脊髓单个核细胞,并调整细胞数为5×109/L。于100μL单个核细胞中加入不同荧光素标记的抗CD4、CD8及CD28抗体各05μg避光孵育30min,用PBS清洗1次,再加入10g/L多聚甲醛200μL待测。同时在含有100μL单核细胞的另1管中加入3种荧光标志的小鼠IgG1抗体避光孵育作为阴性对照。最后上流式细胞仪检测,用CellQuestV32软件对获取的结果进行分析,每份样
8、品分析20000个细胞,减去阴性对照的结果后,以CD4+、CD8+、CD28+细胞数的百分比表示CD4、CD8及CD28的表达。 1.2.7统计学处理各种检测所获数据均以x±s表示,组间比较采用方差分析（OneS同时给药组和LMS预处理组）、第3组（EAE模型组）大鼠于免疫后12d,开始陆续发病。发病前2~3d,出现进食减少、体重下降、毛发失去光泽甚至竖毛,并出现尾巴无
