左旋咪唑诱导实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠脊髓内单个核细胞上cd4，cd28和cd152表达的实验研究

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1、左旋咪唑诱导实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠脊髓内单个核细胞上CD4，CD28和CD152表达的实验研究李侃，李彬，何家富，龚权，张燕翔，张道明，郑晓娟，丁建中【摘要】　　目的观察左旋咪唑（LMS）对实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）大鼠脊髓内单个核细胞上CD4，CD28和CD152表达的影响，并探讨LMS诱发炎性脱髓鞘白质脑病发病机制。方法采用流式细胞术检测EAE大鼠脊髓单个核细胞上CD4，CD28和CD152的表达水平。结果LMS同时给药组和预处理的EAE组大鼠脊髓内单个核细胞上CD4和CD28的表达水平，均明显高于非LMS处理的EAE模型组。结论LMS能促进EAE大鼠脊

2、髓内单个核细胞上CD4和CD28的表达，提示LMS上调CD4和CD28的表达与可能LMS诱发的炎性脱髓鞘白质脑病有关。【关键词】左旋咪唑实验变态反应性脑脊髓炎　　Abstract：ObjectiveToobservetheeffectoflevamisole(LMS)onexpressionsofCD4,CD28andCD152onmononuclearcellsinspinalcordsofratsentalallergicencephalomyelitis(EAE),andstudythepathogenesisofinflammatorydemyelinatingl

3、eukoencephalopathyinducedbyLMS.MethodsUsingfloetry,ononuclearcellsinspinalcordsofEAErats.ResultsTheexpressionlevelofEAEratstreatedayplayacrucialroleininflammatorydemyelinatingleukoencephalopathyinducedbyLMS.　　Keyisole;Experimentalallergicencephalomyelitis　　左旋咪唑(Levamisole,LMS)为四咪唑的左旋异构体，是

4、国家和S具有增强免疫的作用,其作为免疫增强剂被推广用于慢性感染、皮肤疾病、自身免疫性疾病及肿瘤等疾病的免疫调节辅助治疗，长期以来被认为安全低毒。但近二十年来，国内外发现LMS能导致严重的中枢神经系统（S）功能障碍—左旋咪唑性白质脑病。LMS与LMS性白质脑病的因果关系，已被系统的药物流行病学研究所证实〔1〕，但其诱发该病的确切发病机制仍不清楚。实验性变态反应性脑脊髓炎(experimentalallergicencephalomyelitis,EAE)为CD+4T细胞介导的对髓鞘抗原的自身免疫性疾病,是研究炎性脱髓鞘白质脑病的经典动物模型。本研究通过观察LMS对EAE大鼠

5、脊髓内单个核细胞上CD4，CD28和CD152表达的影响，探讨LMS诱发的炎性脱髓鞘白质脑病发病机制。　　1材料　　1.1动物　　雌性SD大鼠，5～8周龄，体重170～210g。豚鼠(雌雄不拘)，质量250～300g，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。动物购回后先适应性饲养1周，饲养条件为室温18～28℃，相对湿度40％～70％，每日12h光照维持，昼夜循环，自由饮水，分笼饲养。　　1.2药物与试剂　　左旋咪唑购于Sigma公司。卡介苗（Bacillecalmetteguerin,BCG）、百日咳疫苗（Bordetellapertussisvaccine,BPV）

6、购于卫生部上海生物制品研究所。淋巴细胞分离液购于美国CaltagLaboratories公司。胰蛋白酶溶液购于杭州吉诺生物医药技术有限公司。FITC标记的小鼠抗大鼠CD152抗体、APC标记的小鼠抗大鼠CD4抗体、PE标记的小鼠抗大鼠CD28抗体以及3种相应荧光素标记的小鼠IgG1抗体，均购自美国Pharmacia公司。　　1.3仪器　　流式细胞仪美国贝克曼库尔特有限公司产品。　　2方法　　2.1抗原的制备将豚鼠经腹腔注射100g/L的水合氯醛麻醉后，经主动脉灌注生理盐水至无血液流出时，小心取出脊髓，剥除脊膜，加预冷的生理盐水制成50%(S同时给药组)：先按体重经腹腔注射

7、NS(10ml/kg)，2次/d，共7d，再经四足垫皮下注射GPSCH-CFA乳剂，0.4ml/只，于第0，24及48小时腹腔注射LMS(10mg/kg)。第2组(LMS预处理组)：先按体重经腹腔给SD大鼠注射LMS(10mg/kg)，2次/d，共7d，再经四足垫皮下注射GPSCH-CFA乳剂，共0.4ml/只，于第0，24及48小时腹腔注射同量NS。第3组(EAE模型组)：先按体重经腹腔注射NS10mg/kg，2次/d，共7d，再经四足垫皮下注射GPSCH-CFA乳剂，共0.4ml/只，于第0，24及48小时经腹腔注射同量的