红霉素对哮喘大鼠外周血单个核细胞磷酸化jnk表达的影响

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1、红霉素对哮喘大鼠外周血单个核细胞磷酸化JNK表达的影响：吴成云，张近波，李智强，戴元荣【摘要】目的：探讨哮喘大鼠外周血单个核细胞(PBMCs)JNK磷酸化表达的变化及红霉素对其影响。方法：分离培养正常对照组、哮喘组、红霉素处理组大鼠的PBMCs。分别采用ELISA方法检测细胞上清液中IL-4，IL-5浓度，逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、CsJNKmRNA、磷酸化JNK的表达。结果：哮喘组PBMCsJNK磷酸化蛋白、mRNA表达水平及细胞上清液中IL-4，IL-5的浓度较正常对照组显著升高(P<0.05)，红霉素处理组

2、JNKmRNA、磷酸化蛋白表达水平及细胞上清液中IL-4，IL-5的浓度较哮喘组显著降低(P<0.05)。通过直线相关分析发现，PBMCsJNK磷酸化蛋白与细胞上清液中IL-4，IL-5的表达水平之间均呈显著正相关(r分别为0.74和0.66，P均<0.05)。结论：JNK可能参与支气管哮喘的病理生理过程。红霉素可能通过作用于JNK这一靶点发挥其抗炎效应。【关键词】支气管哮喘;外周血单个核细胞;JNK蛋白激酶;红霉素　　Abstract:Objective:Tostudythechangesoftheexpressi

3、onofJNKmitogen-activatedproteinkinase(JNK-MAPK)inperipheralbloodmononuclearcells(PBMCs)inratsaandtheeffectsoferythromycinonit.Methods:PBMCsratsa，normalsubjectsanderythromycin-treatedgroup.ThelevelsofproteinofIL-4，IL-5inplasma，JNKmRNAandproteinofJNKinPBMCselinkedimmun

4、osorbentassay(ELISA)，reversetranscriptionpolymerasechainreaction(RT-PCR)andRNA、phosphor-JNKinPBMCsandtheconcentrationofIL-4，IL-5insupernatantsaticgroupthanthoseinnormalgroup(P<0.05).Byerythromycintreated，theaboveindexesaticgroup(P<0.05).Thereayplayaroleinpathop

5、hysiologicalprocessofasthma.Erythromycincaneffectivelytreatasthmathroughinhibitingtheexpressionofp-JNK.　　Keya;peripheralbloodmononuclearcells;JNKmitogen-activated　　proteinkinase;erythromycin　　支气管哮喘是多种炎性细胞和细胞因子参与的气道慢性炎症。炎症学说的确立，给哮喘的防治和研究带来了很大的进展。已有的研究发现，淋巴细胞等炎症细胞及其产生的

6、多种细胞因子(IL-4和IL-5等)和炎症递质参与了哮喘的发病过程[1]。以红毒素、罗红霉素、克拉霉素、阿奇霉素等为代表的14环、15环大环内酯类抗生素对支气管哮喘有较好的治疗作用，可以改善哮喘患者的临床症状，降低气道高反应性。然而其确切的作用机制尚未明确，有文献表明，其抗哮喘作用可能与非抗菌性抗炎作用有关[2-3]。但有关红霉素对哮喘患者外周血单个核细胞(PBMCs)JNK表达的影响目前尚未见报道，本研究通过复制卵白蛋白(OVA)致敏的哮喘大鼠模型，探讨红霉素对哮喘大鼠外周血单个核细胞JNK表达的影响。　　1材料和方法　　1.

7、1材料OVA(Sigma公司);乳糖酸红霉素(大连美罗制药公司);磷酸化JNK和JNK多克隆抗体(SantaCruz公司);Cs分离、培养无菌抽取肝素(30U/mL)抗凝大鼠下腔静脉血5mL，以淋巴细胞分离液分离PBMCs。离心洗涤后，用RPMI-1640培养基调细胞浓度为1×106/L，培养体系中加刺激物PHA10μg/mL，接种于6孔培养板内，相应分为正常对照组、哮喘组和红霉素处理组(即加入终浓度为15μg/mL的红霉素共同培养)。置于5%CO2、37℃培养箱内培养48h，收集细胞和细胞上清液备用，-70℃保存。　　1.4培

8、养上清中IL-4和IL-5测定采用ELISA法检测各组培养上清液中IL-4和IL-5的表达水平，操作按试剂盒说明书进行。　　1.5PBMCs中JNKmRNA检测JNK上游引物为：5’-CCAGATTGGATATTTCCGTCAG-3’，下游引物：5’-TTCCC