红霉素对哮喘大鼠外周血单个核细胞磷酸化jnk表达的影响论文

《红霉素对哮喘大鼠外周血单个核细胞磷酸化jnk表达的影响论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、红霉素对哮喘大鼠外周血单个核细胞磷酸化JNK表达的影响论文吴成云，张近波，李智强，戴元荣【摘要】目的：探讨哮喘大鼠外周血单个核细胞(PBMCs)JNK磷酸化表达的变化及红霉素对其影响。方法：分离培养正常对照组、哮喘组、红霉素处理组大鼠的PBMCs。分别采用ELISA方法检测细胞上清液中IL-4，IL-5浓度，逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、CsJNKmRNA、磷酸化JNK的表达。结果：哮喘组PBMCsJNK磷酸化蛋白、mRNA表达水平及细胞上清液中IL-4，IL-5的浓度较正常对照组显著升高(P0.05)，红霉素处理组JNKmRNA、磷酸化蛋白表

2、达水平及细胞上清液中IL-4.freelitogen-activatedproteinkinase(JNK-MAPK)inperipheralbloodmononuclearcells(PBMCs)inratsaandtheeffectsoferythromycinonit.Methods:PBMCsratsa，normalsubjectsanderythromycin-treatedgroup.ThelevelsofproteinofIL-4，IL-5inplasma，JNKmRNAandproteinofJNKinPBMCselinkedimmu

3、nosorbentassay(ELISA)，reversetranscriptionpolymerasechainreaction(RT-PCR)andRNA、phosphor-JNKinPBMCsandtheconcentrationofIL-4，IL-5insupernatantsaticgroupthanthoseinnormalgroup(P0.05).Byerythromycintreated，theaboveindexesaticgroup(P0.05).Thereayplayaroleinpathophysiologicalproces

4、sofasthma.Erythromycincaneffectivelytreatasthmathroughinhibitingtheexpressionofp-JNK.Keya;peripheralbloodmononuclearcells;JNKmitogen-activatedproteinkinase;erythromycin支气管哮喘是多种炎性细胞和细胞因子参与的气道慢性炎症。炎症学说的确立，给哮喘的防治和研究带来了很大的进展。已有的研究发现，淋巴细胞等炎症细胞及其产生的多种细胞因子(IL-4和IL-5等)和炎症递质参与了哮喘的发病过程1。

5、以红毒素、罗红霉素、克拉霉素、阿奇霉素等为代表的14环、15环大环内酯类抗生素对支气管哮喘有较好的治疗作用，可以改善哮喘患者的临床症状，降低气道高反应性。然而其确切的作用机制尚未明确，有文献表明，其抗哮喘作用可能与非抗菌性抗炎作用有关2-3。但有关红霉素对哮喘患者外周血单个核细胞(PBMCs)JNK表达的影响目前尚未见报道，本研究通过复制卵白蛋白(OVA)致敏的哮喘大鼠模型，探讨红霉素对哮喘大鼠外周血单个核细胞JNK表达的影响。1材料和方法1.1材料OVA(Sigma公司);乳糖酸红霉素(大连美罗制药公司);磷酸化JNK和JNK多克隆抗体(Santa

6、Cruz公司);Cs分离、培养无菌抽取肝素(30U/mL)抗凝大鼠下腔静脉血5mL，以淋巴细胞分离液分离PBMCs。离心洗涤后，用RPMI-1640培养基调细胞浓度为1×106/L，培养体系中加刺激物PHA10μg/mL，接种于6孔培养板内，相应分为正常对照组、哮喘组和红霉素处理组(即加入终浓度为15μg/mL的红霉素共同培养)。置于5%CO2、37℃培养箱内培养48h，收集细胞和细胞上清液备用，-70℃保存。1.4培养上清中IL-4和IL-5测定采用ELISA法检测各组培养上清液中IL-4和IL-5的表达水平，操作按试剂盒说明书进行。1.5PBMC

7、s中JNKmRNA检测JNK上游引物为：5’-CCAGATTGGATATTTCCGTCAG-3’，下游引物：5’-TTCCCAGTCCATCACTTCG-3’(产物片段长度为277bp);β-actin上游引物为5’-TCAGGTCATCACTATCGGCAAT-3’;下游引物为：5’-AAAGAAAGGGTGTAAAACGCA-3’(产物片段长度为412bp)。用Invitrogen公司的Trizol试剂盒，按说明书介绍的方法提取总RNA，按Takara公司说明书的操作步骤逆转录合成cDNA。PCR循环条件为：94℃预变性5min，94℃变性30s

8、，不同退火温度(JNK55℃，β-actin58℃)退火30s，72℃延伸1min，共35个循环;循环结束后