哮喘患者外周血单个核细胞ogg1表达与dna损伤氧化损伤

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1、哮喘患者外周血单个核细胞OGG1表达与DNA损伤氧化损伤摘要目的：氧化应激指体内氧化和抗氧化失衡引起的生理生化过程，近年来研究认为氧化应激参与了哮喘的发生发展，是导致重症哮喘发生的重要原因之一，能够引起细胞DNA损伤。作为胞内修复蛋白8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶，主要受氧化应激调节，其表达特异性，表达量的多少以及与氧化损伤的程度的关系尚有许多疑问。本实验着重哮喘患者外周血单个核细胞，探讨8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(简称：OGG1)在哮喘患者外周血单个核细胞中的表达与氧化应激相关性和DNA氧化损伤情况。方法：收集2011.2-2011.12泸州医学院附属医院呼吸内科就诊的哮喘患者

2、16例，按照GINA（全球哮喘防治创议）标准诊断程序明确支气管哮喘诊断，按照GINA指南急性发作期严重程度分级分为轻中度哮喘组，重症哮喘组，正常人作为对照。所有研究患者均处于急性发作期，对照组为健康体检者。分别抽取外周静脉血，分离血清备用；淋巴细胞分离液分离单个核细胞（PBMC）备用。分别用荧光探针DCF-DA和DHE标记测量各组中胞内平均荧光强度，并用WST法测量外周血血清中SOD表达，检测体内氧化应激情况；同时取外周血单个核细胞做单细胞凝胶电泳实验，检测其外周血单个核细胞中DNA损伤情况；为测量外周血单个核细胞胞内蛋白OGG1表达使用间接荧光免疫方法流式细胞仪测量，并在激

3、光共聚焦观察细胞形态。同理，运用间接荧光免疫检测外周血中单个核细胞胞内的转录活化因子NF-κB表达。结果均使用SPSS13.0软件统计软件，结果以均数±标准差（xs）表示。组间比较采用q检验，相关分析采用直线相关分析；以P<0.05为差异具有统计学意义。结果：1.研究对象一般情况观察：用药前，轻中患者组均能闻及哮鸣音，3例可闻及少许湿罗音，3例出现口唇发绀，吸氧前SpO2为54-95%，吸氧后血气提示均无呼吸衰竭。而重症组呼吸困难均明显，口唇发绀，端坐呼吸。5例患者烦躁不安，3例出现呼吸极度困难，双肺大量哮鸣音和较多湿罗音。吸氧前SpO2均小于89%。SPO2为43-84%

4、，吸氧后血气提示有Ⅱ型呼吸衰竭。所有患者体温均正常。2.荧光探针DCFH-DA标记外周单个核细胞平均荧光强度：流式细胞仪结果显示，轻中度和重症组平均荧光强度分别为(37.81±11.67，65.8±19.27)，与正常对照组平均荧光强度相比（10.90±3.01）明显增高，差异均有统计学意义。在重症哮喘患者平均荧光强度明显高于正常组P=0.002，与轻中度哮喘相比荧光强度也明显增强P=0.046；酶标仪测量结果显示：OD值在轻中组和重症组与对照组相比，增高倍数为（1.29±0.38,2.67±1.13）；重症组与轻中度组相比亦明显增高，P=0.00139，差异有统计学意义。轻

5、中度组较正常组明显增强P=0.011，差异具有统计学意义。细胞离心后，激光共聚焦下观察，轻中组和重症组平均荧光强度分别为（15.63±5.82,35.56±16.15）,与正常对照组（6.08±6.11）荧光强度明显增高。P值分别为0.019,0.003。重症组与轻中度相比，P=0.029，差异具有统计学意义。同理用DHE探针标记测量胞内ROS激光共聚焦下观察，轻中组和重症组平均荧光强度分别为（16.70±14.95,33.52±15.58），与对照组荧光强度（2.20±1.47）相比明显增强。重症组与轻中组比较，P=0.002,轻中度与正常组相比，P=0.00036。差异具

6、有统计学意义荧光强度明显增强。3.DNA损伤情况（单细胞凝胶电泳激光共聚焦下测定DNA拖尾长度）：用单细胞凝胶电泳的方法检测外周单个核细胞DNA损伤情况，图像用cometscore软件分析尾长，轻中组，重症组尾长分别为（22.27±22.26,99.12±90.97,），明显长于对照组（0.70±0.62），差异具有统计学意义（p<0.05）。重症哮喘组彗星实验拖尾最长，轻中组长于正常组。重症哮喘与正常组和轻中组相比，尾长更长p<0.05，轻中度组尾长长于正常组p<0.05。4.外周单个核细胞OGG1表达水平：采用间接荧光免疫流式细胞仪检测，OGG1阳性表达流式结果显示轻中度

7、，重症哮喘组阳性表达率分别为（26.29±16.17,51.95±19.10），与对照组（10.17±9.05）相比较表达率明显增高，p<0.05，差异具有统计学意义。重症哮喘组与轻中度哮喘组相比表达明显增加p=0.003，轻中度与正常组比较P=0.048。激光共聚焦下观察细胞内OGG1表达在轻中度哮喘组，重症哮喘平均荧光轻度分别为（12.15±2.67,24.23±10.25），与正常对照组（3.52±3.76）相比明显增高。重症哮喘组与轻中度组合正常人相比，P值分别为0.036，0.0014。5.酶