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1、HCV患者外周血单个核细胞蛋白质表达质谱分析：储春丽,邓小昭*,张云,董莉莉,王忠灿,喻荣彬,吴超【摘要】 目的:应用比较蛋白质组学的方法分析丙型肝炎患者外周血单个核细胞蛋白质表达模式的变化及寻找丙型肝炎相关生物标记分子,进一步识别鉴定其差异表达蛋白质,分析其对丙型肝炎慢性化机制的意义。方法:应用固相化pH梯度双向凝胶电泳(2-DE)分离健康者(10)及HCV患者(28)PBMC的总蛋白质,凝胶银染显色后,PDQuest图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)获得差异蛋白点的肽质指纹图谱,通过SC凝胶的蛋白质点数分别为6
2、25及614;初步筛选出HCV患者与健康者存在明显差异的12个蛋白点,经质谱分析,初步鉴定了10种蛋白质。这些差异蛋白质包括病毒蛋白、蛋白质合成与分解、三大代谢相关酶类、细胞结构相关蛋白质以及信号转导相关蛋白质。结论:应用2-DE及MALDI-TOF-MS方法建立了HCV患者PBMC双向凝胶电泳图谱,分离并初步鉴定了10种与HCV感染相关的差异表达的蛋白质,为研究HCV慢性化相关机制提供新的线索。【关键词】丙型肝炎病毒蛋白质组学PBMC2-DEMALDI-TOF-MS ［Abstract］AIM:Toinvestigatethediversityofproteins’patternofthe
3、peripheralbloodmononuclearcells(PBMCs)inpatientsechanismofchronichepatitisC.METHODS:ThetotalproteinsfromPBMCsinHCVinfectedpatients(28)andhealthypersons(10)mobilizedpHgradient-based2-DE.Thedifferentiallyexpressedproteinsassfingerprint(PMF)basedonmatrix-assistedlaserdesorption/ionizationtimeofflightma
4、ssspectrometry(MALDI-TOF-MS)anddatabasesearching.RESULTS:2-DEresultsshoeannumberofproteinspotsinHCVinfectedpatientsandhealthypersonseoftheproteinsparticipatedinproteinsynthesisanddegradation,signaltransduction,metabolism,orcytoskeletonconstructioneofthemHCVinfectedpatientsorhealthypersonshasbeenesta
5、blishedandtendifferentiallyexpressedproteinshasbeencharacterized.OurstudyishelpfulforclinicaldetectionofHCVinfectionandfurtherresearchintothemechanismsofchronichepatitisC. ［Keyic;PBMC;2-DE;MALDI-TOF-MS 丙型肝炎病毒（hepatitisCvirus,HCV）感染所引起的丙型肝炎呈全球分布。据C)为免疫活性细胞的集合体,富含T淋巴细胞,其在机体抗HCV感染中起着极为重要的作用［2］。PBMC是H
6、CV肝外存在和复制的重要场所,已经有研究表明病毒在PBMC中的复制是HCV逃避免疫杀伤和丙型肝炎慢性化的重要机制［3,4］。采用蛋白质组学方法研究PBMC蛋白质表达谱、寻找丙型肝炎相关生物标记分子对于HCV的早期诊断、治疗及预后监测具有重要意义。 1材料和方法 1.1材料丙型肝炎患者全血标本于解放军八一医院、南京大学医学院附属鼓楼医院。病例组共28例,均未应用干扰素治疗,其中男15例,女13例,年龄20～70岁。血清HCV-RNA均为阳性,ALT均升高,其中诊断为慢性丙型肝炎26例。正常对照组共10例,标本来自南京市血站的健康献血者,男女各5例,ALT均正常,排除HCV、HBV、EB等感染
7、。2DQuantKit定量试剂盒、尿素、硫脲、NP-40、TritonX-100、二硫苏糖醇(DTT)、碘乙酰胺及固相pH梯度干胶条(IPGstrippH3-10NL,24cm)等均为AmershamBiosciences产品;过硫酸铵、丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、甘氨酸、硫代硫酸钠、碳酸氢铵、铁氰化钾、三氟乙酸及乙腈等为Sigma-Aldrich公司产品;胰蛋白酶(Trypsin)为Promega
