生长抑素类似物对人肝癌细胞株mhcc97

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1、生长抑素类似物对人肝癌细胞株MHCC97作者：孙昊，宋涛，张梅，刘青光，潘承恩【关键词】MHCC97　　InfluenceofsomatostatinanalogueonhumanhepatocellularcancercelllineMHCC97H　　【Abstract】AIM:TostudytheinfluenceofsomatostatinanalogueoctreotideonhumanhepatocellularcancercelllineMHCC97Handitsmechanismsinvivo.METHODS:T

2、ice,oformassly:negativecontrolgroup,loilarconditionfor35dthesurvivaltime,theatrixmetalloprotEInases2（MMP2）inhepatocellularcarcinomamunohistochemicaltechnique.RESULTS:paredalmodelsofnegativecontrolgroup,theanimalmodelsofinterferedgroupseanetastasisrate(P<0.05);aof

3、interferedgroupsprovethelivingqualityofanimalmodelsandinhibitthemetastasisofhumanhepatocellularcancercelllineMHCC97Hinvivo,ightberelatedtothedoaryhepatocellularcarcinoma,PHC)PHC根治性切除后5a复发率为54.1%～61.5%，小肝癌(≤5cm)为43.5%，而局部治疗的转移复发率则更高.常规化疗及放疗效果不佳，副作用大，基因治疗、生物治疗等作用亦不明显.

4、因此，深入研究肝细胞癌转移、复发机制和积极探索有效的抗复发转移治疗措施是当前PHC诊治中的重点和难点.　　1材料和方法　　1.1材料主要试剂和仪器:善宁注射液(0.1mg/支)由瑞士诺华公司生产提供.鼠抗人MMP2抗体AntibodyDiagnosticaInc.　　1.2方法　　1.2.1细胞培养人高转移潜能肝癌细胞株MHCC97H由上海中山医院肿瘤研究所购得，100mL/L胎牛血清（fetalcalfserum,FCS）加达尔伯克改良伊格尔培养基（dulbeccosmodifiedeaglesmedium,DMEM）于50

5、mL细胞培养瓶内37℃，50mL/LCO2及饱和湿度下CO2孵育箱内培养.　　1.2.2动物模型取对数生长期MHCC97H肝癌细胞株，充分吹打至单细胞悬液，细胞冲洗液冲洗3次，DMEM调整细胞浓度至2×107/mL，取0.2mL于4～6周龄的雄性裸鼠背部皮下注射，实验动物于层流室内饲养28d，至皮下结节直径约1cm，无菌条件下取出肿瘤组织保存于37℃含20g/LFCS的DMEM中，粉碎至2mm×2mm×2mm.4～6周龄的雄性裸鼠30只，戊巴比妥钠45mg/kg腹腔注射麻醉后，手术野皮肤消毒，左肋缘下斜切口进腹，显露肝左叶，肿

6、瘤组织块2mm×2mm×2mm大小，接种于肝左外叶，压迫止血，关腹.同等条件下，动物模型层流室内饲养3d，剔除因麻醉意外、感染及出血死亡动物模型3只，余动物模型随机分为3组，动物模型体质量及周龄组间均衡性检验无统计学差异.A组：阴性对照组（等体积生理盐水腹腔注射，n=8）；B组：小剂量干预组（Oct50μg/kg・d腹腔注射，n=9）；C组：大剂量干预组（Oct200μg/kg・d腹腔注射，n=10），同等条件下层流室内饲养35d.　　1.2.3标本检测记录每只动物模型生存时间，死亡时体质量，取肝脏

7、，肺脏40g/L多聚甲醛，0.1mol/L磷酸缓冲液固定48h，组织石蜡包埋，HE染色，免疫组化方法检测对比组间肝脏肿瘤组织MMP2表达变化.染色结果判定参照Mattern方法［1］：阳性染色深度:未见染色为0，轻度染色(染成浅黄色)为1，中度染色(染成棕黄色)为2，深度染色(染成棕褐色)为3；阳性细胞百分比:未见染色为0，染色细胞<25%为1，25%～50%为2，>50%为3.将这两方面得分相加，得分0～2分判为阴性表达，>2分(3～6)判为阳性表达，随机选择10个高倍视野，记数1000个细胞.　　统计学处

8、理：实验计量结果以x±s表示,计量资料组间比较经SAS软件进行方差分析及Dunt检验，计数资料组间比较采用Fisher确切概率法.　　2结果　　人高转移潜能肝癌细胞株MHCC97H种植于裸鼠皮下，层流室饲养35d后发现原注射点皮下形成约1.1×0.9cm包块，实验动物呈现衰竭