雄黄对肝癌细胞株qgy

《雄黄对肝癌细胞株qgy》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、雄黄对肝癌细胞株QGY杨静1张建军2钟森31.雅安市人民医院感染科，四川雅安625000；2.泸州医学院附属医院感染科，四川泸州646000；3.成都中医药大学附属医院肝病科，四川成都610072[摘要]目的研究中药雄黄主要成分As2S2对人肝癌细胞株QGY-7703增值和凋亡的影响及其可能机制。方法2012年9月—2013年4月，分析不同浓度的As2S2处理QGY-7703细胞后，MTT法测定细胞增殖抑制率；流式细胞仪检测细胞凋亡率；免疫细胞化学方法检测PA的表达情况。结果较低浓度（7.5mg/L）的As2S2对QGY-7703细胞的生长无影响；15~120mg/L的As2

2、S2可抑制细胞的生长，具有时间依赖性和浓度依赖性（P<0.01）。As2S2在15~30mg/L范围内，细胞凋亡率随浓度和作用时间增加而增加（P<0.01）；60mg/L组凋亡率比低浓度组低，表现为继发性坏死细胞增多。As2S2处理组可明显降低PA蛋白的阳性表达（P<0.01）。结论As2S2在一定的浓度范围内可以诱导QGY-7703细胞发生凋亡，通过下调PA的表达抑制细胞的增殖，随着作用时间的延长和（或）浓度的提高，As2S2表现出一定的细胞毒作用，促进肿瘤细胞坏死。.jyqka公司，配制方法参照文献4，RPMI1640袋装培养基购自美国Gibco公司，小

3、牛血清购自杭州四季青生物公司，DMSO及MTT购自美国Amresco公司，AnnexinV-FITC凋亡检测试剂盒购自美国Beckman公司，鼠抗人PA单克隆抗体购自武汉博士德生物工程有限公司。人肝癌细胞株QGY-7703由泸州医学院实验室提供。1.2细胞培养人肝癌细胞株QGY-7703常规复苏后用含10%新生小牛血清的RPMI1640培养液在含5%CO2、37℃培养箱中培养。培养液中分别含有青霉素、链霉素各100U/mL。取对数生长期的细胞进行实验。1.3MTT法观察As2S2对肝癌细胞株增殖的影响将QGY-7703细胞制成单细胞悬液，调整细胞密度为3.0×104个/mL，

4、接种于96孔培养板内（200μL/孔），同时设实验组（不同浓度的As2S2处理）、对照组（不加药物的细胞）和空白组（调零），每组设5个复孔。次日细胞贴壁后，实验组弃去培养液加不同浓度的As2S2，培养24h、48h、72h后，每孔加入MTT液20μL（5g/L），于培养箱中继续培养4h。吸去上清液，每孔加入DMSO150μL，震荡10min，用酶联免疫检测仪于490nm波长处测定其吸光度（A）值，按公式计算：细胞增殖抑制率＝(1－实验组A值/对照组A值)×100%。1.4流式细胞仪技术观察As2S2对肝癌细胞株凋亡的影响胰蛋白酶消化细胞成单细胞悬液，以1.0×105个/mL的

5、密度接种于6孔培养板内（2.5mL/孔）。次日细胞贴壁后，实验组加入含不同浓度As2S2的培养基。分别培养48h、72h后，弃去培养液，收集细胞。实验组分别加入AnnexinV(FITC标记)5μL、PI2.5μL，避光冰上孵育10min，进行流式细胞仪检测。1.5免疫细胞化学方法检测PA的表达胰蛋白酶消化细胞成单细胞悬液，以4×104个/mL的密度接种于预置玻片（经多聚赖氨酸处理）的6孔培养板内（2.5mL/孔），置于37℃、5%CO2孵箱中培养。次日细胞贴壁后，实验组弃去培养液，每孔重新加入含不同浓度As2S2的培养基2.5mL，使As2S2终浓度分别为15mg/L、30

6、mg/L。培养48h后，取出玻片按SABC法进行免疫细胞化学染色，按试剂盒说明书操作，PBS代替一抗作阴性对照。1.6统计方法采用SPSS13.0统计软件对数据进行统计分析。计量资料用均数士标准差(x±s)表示，采用单向方差分析(One-g/LAs2S2对QGY-7703细胞生长无影响（P>0.05）。15~120mg/L的As2S2可抑制细胞的生长，且在此范围内抑制率随着浓度增加而增加，具有时间依赖性和浓度依赖性，差异有统计学意义（P<0.01）。15mg/LAs2S2处理组作用24h抑制率是（8.01±1.93）%，72h达（59.93±4.63）%。而120

7、mg/LAs2S2处理组作用24h、72h的抑制率分别是（43.10±1.79）%、（83.56±3.49）%。As2S2的浓度、作用时间和抑制率之间的关系见图1。2.2流式细胞仪检测As2S2对QGY-7703细胞凋亡的影响如表1所示，与对照组比较，实验组细胞凋亡率呈不同程度上升，与此同时，活细胞数随雄黄浓度增高而急剧下降。As2S2在15~30mg/L范围内，细胞凋亡率随浓度增加而增加，而继发性坏死细胞比例也在增加。60mg/L组出现细胞凋亡率较低浓度组减低，表现为继发性坏死细胞增多。2.3免疫细胞