阿霉素诱导肝癌QGY-7701细胞凋亡的研究.pdf

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1、第30卷第4期齐齐哈尔大学学报Vo1．30，No．42014年7月JournalofQiqiharUniversityJuly，2014阿霉素诱导肝癌QGY一7701细胞凋亡的研究夏艳，邵淑丽，张希锐，张伟伟，李凤英(齐齐哈尔大学生命科学与农林学院，黑龙江齐齐哈尔161006)摘要：观察阿霉索对人肝癌细胞株QGY一7701的凋亡诱导作用。实验用阿霉素处理QGY一7701细胞后，用台盼蓝拒染法检测细胞增殖活性；光镜、荧光显微镜、透射电镜观察细胞凋亡形态；DNA琼脂糖凝胶电泳技术观察分析细胞凋亡情况；

2、流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化。结果显示，阿霉素处理QGY一7701细胞后，出现了明显的凋亡现象，而且随着药物浓度的增加，细胞凋亡的趋势越明显。分析结果可知，阿霉素作用QGY一7701细胞48h的Ico值为4．9lag／mL。流式细胞仪检测出阿霉素处理QGY一7701细胞的凋亡率逐渐上升。综上所述，阿霉索可以诱导QGY一7701细胞出现凋亡的现象。关键词：阿霍素；QGY一7701；细胞凋亡中图分类号：Q291文献标志码：A文章编号：1007—984X(2014)04—0060一o4肝癌是指发生于肝

3、脏的恶性肿瘤，其死亡率仅次于胃癌、食道癌，是第三大常见恶性肿瘤。肝癌的主要治疗方法是化疗，但是随着治疗时间的延长易使肿瘤产生耐药性，影响肝癌的治疗效果。所以，寻找新的有效的治疗药物是肝癌治疗的新方向。阿霉素是一种抗生素，属周期非特异性药物，有研究表明，阿霉素对肺癌、乳腺癌、卵巢癌等有一定的抑制作用“，在细胞凋亡中有重要作用。现已有不少研究者在研究其诱导凋亡的作用。本实验旨在研究阿霉素对肝癌QGC一7701细胞凋亡的影响，为阿霉素的抗肿瘤作用提供更有利的依据。1材料和试剂人肝癌细胞株QGC-7701

4、购于中国科学院上海细胞生物研究所。阿霉索(adriamycinADM)购于浙江海正药业股份有限公司；RPIM一1640培养基于粉购于HyClone；优基胎牛清购于上海生工；琼脂糖购于上海生工；Tris饱和酚购于北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司。2方法2．1细胞培养体外培养的人肝癌QGY一7701细胞生长于含10％FBS、100U／mL青霉素、100~g／mL链霉素的RPMI1640完全培养液中，于37℃、5％C0的孵育箱中培养，呈上皮样单层贴壁生长，隔天换液，用O．25％胰酶将细胞消化，用直接吹打

5、法传代，待细胞长至对数生长期进行实验，实验中细胞均以5X10个／mL的密度接种。2．2细胞抑制率测定按照5×10的密度接种细胞，培养至对数期后，向细胞中加人不同浓度的阿霉素，0~mol／L为空白对照组，用台盼蓝据染法测得阿霉素作用A549细胞48h的抑制率，同时，根据抑制葺聂绘制阿霉素对QGY一7701细胞的抑制fH1线，并通过软件计算其Ic。值。确定阿霉素作用肝癌QGY一7701细胞的1c值后，在Ic加附近取不同的浓度作为实验的浓度梯度。2．3荧光显微镜观察细胞形态变化阿霉素处理细胞48h后，将

6、培养瓶中的培养基倒掉，用磷酸盐缓冲液PBS洗涤细胞2遍，向培养瓶中加2t．tLI1'f啶橙，静止1min，用荧光显微镜观察。收稿日期：2014—03—21基金项目：黑龙江省自然科学基金项目(C200624；C201241)；黑龙江省教育厅科学技术项目(11511447；12511611)作者简介：夏艳(1987一)，女，在读硕士研究生，主要从事遗传学方面的研究，qidaxiatian@163∞ftm。第4期阿德素诱导肝癌QGY一7701细胞凋的研究·63·素可以诱导人涎腺腺样囊性癌SACC一83细

7、胞凋亡，阿霉素处理细胞后，细胞表现出明显的凋亡特征，DNA片段化，细胞周期被阻滞在G2／M期。阿霉索还可以诱导不同乳腺癌细胞株凋亡，通过影响其基因表达使乳腺癌细胞凋亡。胡晓文等在研究中指出，阿霉素作用Tca8113细胞后，细胞出现明显的凋亡现象，除此之外，还对凋亡相关基因bcl一2、bax、survivin有一定程度影响。除此之外，阿霉素还对乳腺癌、肺癌、卵巢癌等肿瘤细胞有明显的抑制作用。还可以与其他药物联合作用，且药效更加明显。综上所述，阿霉素诱导细胞凋亡，抑制细胞增殖。为进一步探讨抗肿瘤药物治

8、疗机制提供有力依据。然而，阿霉索诱导肿瘤细胞凋亡的机制还有待于研究。参考文献f11王新，李德华．阿霉索诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究进展[J]．中国实用医药，2010，5(7)：247-249『2]JemalA，SiegelR，WardE，eta1．Cancerstatistics2009[J]．CancerJClin，2009，59(4)：225-49f31李文艺．细胞凋亡研究进展『J]．畜牧与饲料科学，2010，31(11-12)：17—19『41李旭奎，周昌龙，饶国州，等．阿霉素