沙利度胺对人肝癌细胞株smmc7721体外增殖影响

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1、沙利度胺对人肝癌细胞株SMMC7721体外增殖影响：孙萍张良明孙等军董亮亮【摘要】目的观察沙利度胺对人肝癌细胞株SMMC7721体外增殖的影响。方法分别应用浓度为3.125、6.250、12.500、25.000、50.000、100.000及200.000mg/L的沙利度胺溶液作用于SMMC7721细胞，同时以等体积的RPMI1640培养液为空白对照组,MTT法测定各组细胞增殖抑制率。结果沙利度胺浓度从3.125mg/L依次增至200.000mg/L，其对SMMC7721细胞增殖抑制率从11.70%依次增加至34.21%。25.000mg/L以上浓度沙利度胺组的吸光度值与

2、空白对照组比较差异有显著性(F=3.093，q=4.02～5.37,P<0.05、0.01)。结论沙利度胺能抑制SMMC7721细胞的生长，且随着药物浓度的增加，细胞抑制作用逐渐增强。【关键词】沙利度胺;肝肿瘤;细胞增殖[ABSTRACT]ObjectiveToobservetheeffectsofthalidomideonproliferationofhumanhepatomaSMMC7721cellsinvitro.MethodsTheSMMC7721cellsidesolutionofdifferentconcentrations(3.125,6.250,12.5

3、00,25.000,50.000,100.000,and200.000mg/L),andtheculturemedium1640servedascontrol.Theproliferationinhibition(PI)ratesindifferentgroups11.70%to34.21%alongidesolutionfrom3.125mg/Lto200.000mg/L.ThedifferencesofabsorbanceofSMMC7721betg/Landthecontrolgroupidecaninhibitthegroide;Liverneoplasms;Cell

4、proliferation　　沙利度胺是一种谷氨酸衍生物，最初用于治疗早孕反应和镇静催眠，后来因其有严重的致畸作用而被禁用。20世纪90年代，有学者发现沙利度胺具有抑制血管生成的作用而将其应用于髓系肿瘤的治疗，目前将其应用于实体瘤治疗的研究较少。本文测定了沙利度胺对人肝癌细胞株SMMC7721体外增殖的影响，探讨其对肝癌血管生成的作用，现将结果报告如下。　　1材料与方法　　1.1实验材料　　1.1.1药物及试剂RPMI1640培养基，GIBCO公司生产。新生牛血清，中美合资兰州民海生物工程有限公司生产。胰蛋白酶，美国Sigma公司生产。VEGFELISA试剂盒,购自晶美生物工程

5、公司。沙利度胺，常州制药厂惠赠。　　1.1.2细胞株人肝癌细胞株SMMC7721购自中国医学科学院药物研究所药理室。　　1.1.3仪器CO2培养箱(Forma3110，USA)，超净工作台(B1360，哈尔滨东联)，酶标仪(BioTEKSynergyHT,USA)，倒置显微镜(NikonTE2000)，细胞培养瓶(Costar,USA)，96孔细胞培养板(Costar,USA)。　　1.2实验方法　　1.2.1药物及试剂配制将RPMI1640培养基500mL加水1L，补加2g碳酸氢钠，10万单位青霉素和100mg链霉素，调节pH值至7.4，用0.22μm除菌滤膜过滤除菌。将

6、9份经以上处理的培养基加灭活新生牛血清1份即为完全培养液。胰蛋白酶用Dhanks缓冲液配成浓度为2.5g/L的溶液，过滤除菌后-40℃保存备用。取沙利度胺加入DMSO配成120g/L原液，取10μL加入到1mL完全培养液中，制成终浓度为1.2g/L的待测样品溶液。　　1.2.2细胞培养及处理肝癌细胞均贴壁培养于含5mL完全培养液细胞培养瓶中，于37℃、含体　　420青岛大学医学院学报45卷　　积分数0.05CO2、饱合湿度下培养。细胞长成完整单层时，胰蛋白酶消化后收集细胞，用移液管吹打均匀，取两滴细胞悬液台盼蓝染色，显微镜下计数活细胞数目(死细胞数目不得超过5%)，用完全培养液调

7、整细胞密度为5×107/L，于96孔细胞培养板中每孔加入100μL细胞悬液，置于CO2培养箱中培养24h。于每孔中补加不等体积完全培养液，再加不同体积的待测样品，使得药物的终浓度分别为3.125、6.250、12.500、25.000、50.000、100.000及200.000mg/L，每组分别设4个复孔。空白对照组加入等体积RPMI1640培养液。放入37℃培养箱继续培养。　　1.2.3细胞增殖抑制率的测定采用MTT法。加药后2d，每孔加入MTT溶液(5g/L)2