胰岛素样生长因子1对脊髓源性神经干细胞定向分化的影响论文

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1、胰岛素样生长因子1对脊髓源性神经干细胞定向分化的影响论文张殿君刘一付长峰宿小云李相军韩宏志【摘要】目的探讨胰岛素样生长因子1（IGF1）在脊髓源性神经干细胞定向分化中的作用。方法分离新生24h的大鼠脊髓源性神经干细胞，用脂质体法将构建的重组载体pCDNA3.1GFPIGF转染至细胞内，光学显微镜观察细胞凋亡及分化情况。结果转IGF1基因的脊髓源性神经干细胞可在无生长因子的培养基内增殖，并向神经元细胞分化。结论IGF1可在体外抑制脊髓源性神经干细胞的凋亡，并定向诱导脊髓源性神经干细胞向神经元细胞方向转化。【关键词】神经干细胞；脊髓源性；胰岛素样生长因子

2、1；细胞分化脊髓损伤后可导致较高的致残率，但医学上尚未找到较好的治疗方法。脊髓源性神经干细胞的发现为中枢神经系统损伤后的再生治疗提供了新的途径〔1，2〕。作为成体干细胞，这些细胞通常处于静止状态.freela公司；脂质体2000购自Invitrogen公司；新生24h内的EM/F12培养基，从脊柱一端进针充分冲出脊髓组织，不锈钢筛网进行碾压，分离单个细胞。用神经细胞培养液（DMEM/F12为基础培养基，B27添加剂终浓度为1%，bFGF和EGF终浓度均为20ng/ml）调节细胞终浓度为2×105，接种到10cm平皿，37℃、5%CO2培养箱中进行培养。1.2.

3、2转IGF1基因脊髓源性神经干细胞的建立将传代培养细胞接种于6孔培养板中，贴壁细胞达60%～70%时，常规脂质体法进行转染。转染后48h，将细胞消化传代至10cm平皿中，用含G418（600μg/ml）的DF完全培养基进行筛选，含300μg/mlG418的完全培养基维持培养。1.2.3IGF1对神经干细胞的作用将上述脊髓源性神经干细胞及转IGF1基因脊髓源性神经干细胞分别消化传代，接种于6孔培养板中，培养基内去除生长因子（bFGF/EGF/B27），继续培养48h。光学显微镜观察细胞增殖及分化情况。2结果2.1转基因脊髓源性神经干细胞的建立本研究选择了脂质

4、体2000，将重组质粒和脂质体混匀形成复合体，然后转染到细胞中，24h后荧光显微镜下观察转染情况（图1）。2.2转基因与非转基因脊髓源性干细胞的增殖与分化倒置相差显微镜观察转基因前后细胞增殖分化的变化（图2）。由图中可以看出未转染IGF1的神经干细胞在去除生长因子的培养基中难以维持增殖（图2），48h后细胞发生凋亡（图2）；而转IGF1基因神经干细胞可维持克隆样生长（图2），并向神经元细胞方向分化（图2）。3讨论多年来，关于脊髓损伤治疗的研究多集中在如何减少神经元凋亡，降低继发性损伤以及改善内环境，促进神经再生等方面。随着生物技术的发展，人们希望能够获得可以

5、分化为神经细胞的种子细胞，进而移植到受损神经组织内,.freeleiN，TanakaN，OishiY,etal.BDNF，NT3，andNGFreleasedfromtransplantedneuralprogenitorcellspromotecorticospinalaxongrocellsandolfactoryensheathingcellsfortherepairofspinalcordinjuries〔J〕.MedHypotheses，2007;69(6):12347.3闫长祥，安沂华，历俊华.大鼠脊髓源性神经干细胞的培养分化及其特征性研究〔J〕

6、.中华神经外科杂志，2003；19（2）：1357.4KohyamaJ，KojimaT，TakatsukaE,etal.Epigeicregulationofneuralcelldifferentiationplasticityintheadultmammalianbrain〔J〕.ProcNatlAcadSciUSA，2008;105(46):180127.5BukovskyA，CaudleMR，SvetlikovaM.Steroidmediateddifferentiationofneural/neuronalcellsfromepithelialov

7、arianprecursorsinvitro〔J〕.CellCycle，2008；7(22):357783.6付长峰，刘一，李相军，等.IGF1抑制SCI大鼠脊髓前角神经元凋亡的体内实验〔J〕.吉林大学学报(医学版)，2006；32（4）：568.7KalluriHS，VemugantiR，DempseyRJ.Mechanismofinsulinlikegroediatedproliferationofadultneuralprogenitorcells：roleofAkt〔J〕.EurJNeurosci，2007;25(4):10418.8HungK

8、S，TsaiSH，Lee