血小板源性生长因子及胰岛素样生长因子对大鼠腰椎间盘退变的影响

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1、万方数据东南大学学嚣‘医萝竖；2009，Jun；28(JSoutheastUnivMedScEd3)．185-188(ii)⋯一’⋯。⋯⋯·185·血小板源性生长因子及胰岛素样生长因子对大鼠腰椎间盘退变的影响周涛1，吴小涛2(1．东南大学临床医学院，江苏南京210009；2．东南大学附属中大医院骨科，江苏南京210009)[摘要]目的：探讨血小板源性生长因子(PDGFs)及胰岛素样生长因子(IGFs)对大鼠椎间盘退变(IDD)的影响。方法：36只成年健康SD大鼠，随机分为PDGFs实验组、PDGFs加IGFs实验组及阴性对照组3组

2、，通过手术方法建立IDD模型。在术后不同时期对3组分别注射PDGFs、PDGFs加IGFs及生理盐水，于造模后1个月和2个月每组分别处死6只大鼠，完整取出L3．。椎间盘测量蛋白多糖含量。取L4．，椎间盘使用免疫组化法检测Ⅱ型胶原含量，取L5。。椎间盘使用流式细胞仪检测各组大鼠椎间盘细胞的凋亡情况。结果：造模当日和术后1个月开始注射试剂的3组椎问盘蛋白多糖含量、Ⅱ型胶原含量及细胞凋亡率差异均有统计学意义(均P<0．05)。结论：PDGFs对大鼠IDD有预防和治疗作用，PDGFs与IGFs联用有协同作用。[关键词]椎间盘；退行性变；血

3、小板源性生长因子；胰岛素样生长因子；大鼠[中图分类号]R-33；R681．53[文献标识码]A[文章编号]1671-6264(2009)03-0185·04椎间盘退变(intervertebraldiscdegeneration，IDD)是下腰痛和腰椎间盘突出症的主要原因⋯，临床上的保守治疗和手术治疗效果均不甚理想旧J。随着生物化学、分子生物学的发展，生长因子与IDD的关系备受国内外学者的关注旧j。血小板源性生长因子(PDG-Fs)作为一种人体内含量甚微而有多种生物学活性的多肽，对间充质来源的细胞有较强的促细胞分裂、促基质合成的作

4、用，是体内重要的细胞因子之一。PDGFs具有多种生物学效应，在软骨形成以及代谢调节中起重要作用，有抑制某些有害刺激的凋亡诱导作用HJ。有学者在人退变腰椎问盘组织中用免疫组化方法测得PDGFs的存在怕1；另有学者在PDGFs干预下培养人椎间盘细胞，结果表明一定浓度PDGFs可以减少椎间盘细胞凋亡【6J。胰岛素样生长因子(IGFs)是一种低分子质量多肽，具有胰岛素样作用。其在体外培养条件下具有维持细胞表型、促进细胞外基质合成、抑制凋亡和促进细胞增殖作用07。。动物实验捧圳表明，IGFs具有明显抗凋亡作用，可刺激髓核细胞蛋白聚糖的合成，

5、缩短有丝分裂时间，抑制MMPs的生成增加。以上结果提示，PDGFs及IGFs与IDD关系密切。本研究应用PDGFs及IGFs对大鼠IDD模型进行干预，通过免疫组化法观察Ⅱ型胶原改变、检测椎间盘蛋白多糖含量及流式细胞仪检测细胞凋亡率，探讨PDGFs及IGFs对大鼠腰IDD的影响。[基金项目]江苏省自然科学基金资助项目(BK2007107)[作者简介]周涛(1976一)，男，安徽马鞍111人，在读硕上研究生。[通讯作者]吴小涛E·mail：wuxiaotao@medmail．corn．ca1材料和方法1．1动物和试剂3月龄清洁级Spr

6、ague-Dawley(SD)大鼠36只，雌雄不限，平均体重300g，由东南大学医学院实验动物中心提供。PDGFs、IGFs及凋亡试剂盒购自北京博奥森生物技术有限公司，间三苯酚购自国药集团化学试剂公司，日本OLYMPUS光学显微镜。1．2动物的分组及模型的建立腰IDD动物模型参考陈德胜等¨叫的方法建立，具体方法：大鼠以1％戊巴比妥钠(40mg·kg一)腹腔注射麻醉，俯卧位，固定四肢，背部备皮，消毒铺单。以L3为中心切除大鼠关节突、棘突及棘上棘间韧带，切断双侧竖棘肌，依层次缝合皮下筋膜、皮肤后放人单独笼中饲养。术后连续3d每只大鼠予

7、青霉素5万U肌肉注射。造模成功后大鼠随机分为6组，每组6只。随机选取其中两组作为PDGFs实验组，分别于造模当日及造模后1个月腹腔注射PDGFs(100ng·kg一)，隔日1次，连续1个月；随机选两组为PDGFs加IGFs实验组，分别于造模当日及造模后1个月腹腔注射PDG—Fs(100ng·kg“)及IGFs(100ng·kg“)，隔131次，连续1个月；另两组为阴性对照组，分别于造模当日及造模后1个月腹腔注射等量生理盐水，注射频次及持续时间同前两组。36只大鼠全部存活，分别于术后1、2万方数据·186·东南大学学报(医学版)20

8、09年6月，28(3)个月分批处死各组大鼠，立即取出腰椎，仔细剔除椎间盘周围肌肉，沿L3、L4、L5、L6椎体的上下终板完整取下L，小L4小L5～。椎间盘。L3一。、L5一。椎间盘标本置于超低温冰箱中分别留待检测蛋白多糖及作流式细胞仪检测用；L4。