兔缺血心肌中移植自体骨髓基质干细胞的治疗作用

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1、兔缺血心肌中移植自体骨髓基质干细胞的治疗作用【关键词】缺血心肌Autologousmarroalcelltransplantationforimprovingrabbitcardiacperformanceaftermyocardialinfarction　　【Abstract】AIM:Totestthehypothesisthatmarroalcells(MSCs),plantedintoselfmyocardium,canundergomilieudependentdifferentiation,expresscardiomyogenicphenotypesanden

2、hanceangiogenesisandcardiacfunctionofischemicheartsinvivo.METHODS:Acutemyocardialinfarctionodeoxyuridine)invitroinistratedintramyocardiallyintotheinfarctareaofthesamedonorrabbits.RESULTS:After4onstratedmyogenicdifferentiationberofvessels［(22.9±6.6)/HPvs(19.0±5.9)/HP,P<0.05］inmyocardial

3、ischemiaarea,paredplantationresultedinmarkedlyimprovedleftventricularcontractility［LVSP:(15.08±0.84)kPavs(13.26±0.68)kPa;LVEDP:(1.53±0.28)kPavs(19.03±0.41)kPa;+dp/dtmax:(+615.77±48.69)kPa/svs(+435.75±58.25)kPa/s;-dp/dtmax:(-401.17±46.23)kPa/svs(-338.25±50.72)kPa/s,P<0.05］.CONCLUSION:Au

4、tologousMSCstransplantationcaneffectivelytreatmyocardialischemiamunerejection.　　【Keyarroalcell；ischemicmyocardium；transplantation　　【摘要】目的：验证骨髓基质干细胞（MSC）移植到缺血心肌中后是否在心肌的微环境中可以向心肌细胞分化，提高心功能.方法：采用自体MSC体外培养扩增移植.在通过结扎冠状动脉造成急性心肌缺血后，被5溴2脱氧尿苷（BrdU）标记后的MSC移植到自体的缺血心肌中.结果：移植4ax:（+615.77±48.69）kPa/svs

5、（+435.75±58.25）kPa/s;-dp/dtmax:（-401.17±46.23）kPa/svs（-338.25±50.72）kPa/s,P<0.05］.结论：MSC移植可治疗心肌缺血，并且没有免疫排斥反应.　　【关键词】骨髓基质干细胞；缺血心肌；移植　　　0引言　　在离体实验中发现骨髓基质干细胞（marroalcells，MSC）可以被5杂氮胞苷诱导为心肌细胞［1］.由于自体MSC容易被获取，而且具有较强的增殖能力，自体MSC应用于临床可以不再需要胚胎组织和应用免疫抑制剂，因此较其他来源的供体细胞更有优势.为了同未来的临床实践相吻合，我们应用自体MSC移

6、植入缺血心肌中，而没有用被诱导后的MSC.目的是着重探讨移植后MSC特异性蛋白的变化及其对与心功能的影响.　　1材料和方法　　1.1材料　　取健康雄性的新西兰兔(2.5~3.5)kg（浙江大学医学院动物实验中心），经耳缘iv戊巴比妥纳（30mg/kg）麻醉，用骨髓穿刺针无菌抽取骨髓，Percoll细胞分离液分离细胞，接种于培养瓶中，培养液用含200mL/L胎牛血清的完全LDMEM（2mmol/LL谷氨酰胺，1×104U/L青霉素和25μg/L两性霉素），37℃，50mL/LCO2孵箱静置培养.抽取的每个动物的骨髓基质干细胞及每个动物均进行编号.取传第2代的MSC于移植前2

7、4h用BrdU(5溴2脱氧尿苷,Sigma)标记骨髓基质干细胞，10μLBrdU贮液(BrdU,50mg;二甲基亚砜0.8mL;三蒸水1.2mL)加入5mL完全培养液中.移植前用PBS调整细胞密度为1×1011/L.标记细胞的检测（免疫组化）：先加2mol/L盐酸（室温，50min），正常山羊血清封闭10min，不洗，甩掉，加含3g/LTritonX100的1∶40鼠抗BrdumAb（抗体稀释液稀释），加入生物素标记的羊抗鼠抗体（室温80min），加入SABC复合物室温50min，DAB显色，脱水、透明、封片.　　1.2方法