骨髓基质干细胞移植治疗兔股骨头缺血性坏死的实验研究论文

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1、骨髓基质干细胞移植治疗兔股骨头缺血性坏死的实验研究论文刘长安，王江泳，张卫平，步建立【摘要】［目的］探讨骨髓基质干细胞移植对股骨头缺血性坏死的治疗作用和修复机理，为临床应用提供依据。［方法］24只新西兰大白兔随机分为两组，A组为髓芯减压组，B组为干细胞移植组。采用液氮冷冻法造模。A组钻孔后植入空白明胶海绵，B组钻孔后植入复合有骨髓基质干细胞的明胶海绵。术后每组分别于2、4、6、8周各处死3只动物.freelentalstudyontreatmentoffemoralheadnecrosisinrabbitarroalcells∥Abstract：［Objective］Toi

2、nvestigatetherepairingeffectandmechanismfortreatmentoffemoralheadnecrosisontransplantationofbonemarroalcells.［Method］Tly,GroupAascoredepressiongroupandGroupBasBonemarroalcellsautograftgroup.Animalfemoralheadneorosismodeladebyfreezingmethodplantedarroalcells.Threeanimalsineverygroupicroscop

3、eexamination.［Result］（1）Radiographexamination:At2ages.At4edaroundthedrilledholesinGroupAandtrabeculaeappearedinthedrilledholesingroupB.（2）Microscopeexamination:ingroupA,at2atorycellsappearedintheholesanyosteoblastsandostoidappearedaroundthedrilledholes.At8arroedinthedrilledholesingroupB,.f

4、reelountofosteoblastsinthedrilledholesandsomeostoidformedaroundthcdrilledholes.At4aturedarroarroalcellsautograftingmaybeaneffectiveoralheadnecrosis.Keyoralheadnecrosis；animalmodel;bonemarroalcell；cellculture;transplantation近年来一些研究发现骨髓基质干细胞（bonemarroalcell，BMSC）减少与股骨头缺血性坏死有密切关系。有报道用自体红骨髓移植治

5、疗股骨头缺血性坏死取得了较好的疗效。认为移植于股骨头内BMSC的数目决定着治疗的成败。本实验用移植体外增殖的BMSC治疗兔股骨头缺血性坏死，探讨BMSC在早期股骨头缺血性坏死治疗中的作用及修复机理，为临床提供理论依据和合理的治疗方法。1材料与方法1.1动物分组成年新西兰大白兔24只，雌雄不限，年龄4～5个月，体重2.5～3.5kg。由白求恩国际和平医院动物实验室提供。随机分为A、B2组，每组12只。A组为髓芯减压组，B组为细胞移植组。1.2主要试剂地塞米松磷酸钠注射液，浙江仙琚制药股份有限公司，国药准字：H330220827，批号：041105。DMEM细胞培养液，GIBC

6、O公司。胎牛血清，杭州四季青公司。1.3BMSC的获取和培养从实验动物髂后上嵴处抽取骨髓。全骨髓培养。用硬膜外穿刺针刺入髂骨1～1.5mm，以含有100μ／ml肝素0.2ml的5ml注射器，迅速抽取骨髓2ml，所获骨髓种植于6孔细胞培养板内，每孔种植1ml，每只实验动物种植2个孔。加入含20%胎牛血清DMEM液5ml，反复吹打，再加入地塞米松10-8mmol／L，微型震荡器上震荡2min，然后放入细胞培养箱内培养。培养箱温度37℃，含5%CO2，100%饱和湿度。5d后换液，冲去红细胞，可见多个成纤维细胞克隆贴壁生长。待细胞长满培养孔面积一半时，用0.25%胰蛋白酶消化，原

7、孔传代，2～3d可见细胞长满培养孔，将其按1×106／cm2密度传入细胞培养瓶内。待第3代细胞长满后，消化细胞并将细胞配成2×106／ml细胞悬液，复合于3cm×4cm的明胶海绵上。每块明胶海绵含细胞悬液50μl，共10万个细胞，在细胞培养箱中孵育4h备用。1.4动物造模及细胞移植所有动物双侧股骨头均参加实验。取俯卧位。硫贲妥钠40mg/kg腹腔麻醉。后侧入路，暴露股骨头后不脱位。用液氮棉球连续冷冻3min。自然复温后，用直径为3.5mm钻头从股骨颈内后侧向股骨头内钻入4mm，到达关节软骨下。A组钻孔后，植入明胶海