自体骨髓干细胞移植治疗兔糖尿病下肢缺血性疾病的实验的研究

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1、英文缩写河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。研究生签名：葫如司导师签名姆防乞导签名；孑袱曰年；’月橱日研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成

2、果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：评蒜童同导师签名：◇移年多月莎孝’日中文摘要自体骨髓干细胞移植治疗兔糖尿病下肢缺血性疾病的实验研究摘要研究背景：随着人类生活水平的提高和老龄社会的到来，糖尿病的发病率逐年增高，其并发症糖尿病足和截肢所带来的医疗耗费巨大，给社会带来沉重的经济负担。传统治疗主要是内科的药物治疗、外科的手术治疗及介入治疗进行血流重建，疗效均不够理想。干细胞移植这项新技术在

3、此领域的临床应用得到越来越多的关注，给糖尿病足的治愈提供了新方法。第一部分糖尿病动物模型的制作目的：本实验选用四氧嘧啶(ALx)诱导糖尿病动物模型，探索一种安全、稳定、动物低死亡率的糖尿病模型建立方法。方法：健康新西兰兔20只，随机分为A、B两组，每组lO只。两组给药前均禁食12小时，A组为一次给药法组，即按150mg／kg经耳缘静脉快速注射新鲜配置的5％ALX；B组为两次给药法组，第1次给药，按80mg／kg经耳缘静脉快速注射新鲜配置的5％ALX，24小时后第2次给药，按120mg／埏再次经耳缘

4、静脉快速注射新鲜配置的5％ALX。14天后测中文摘要空腹血糖值，以空腹血糖>16mmol／L作为造模成功的标准。结果：A组48小时内死亡4只，第3天死亡2只，第5天死亡1只，死亡率70％，1只血糖短暂升高，两周后恢复正常，2只达到糖尿病模型标准，成模率20％；B组48小时内死亡1只，死亡率1O％，1只血糖短暂升高，两周后恢复正常，8只达到糖尿病模型标准，成模率80％。结论：1．ALX连续2次小剂量给药法优于1次性高剂量给药，降低了死亡率，提高了成模率。2．应用ALX制备糖尿病模型，是一种经济、安全

5、、可靠的方法。关键词：四氧嘧啶；糖尿病；动物模型；兔第二部分糖尿病兔骨髓干细胞动员及影响目的：通过监测健康兔、糖尿病兔及未成模兔三组应用相同剂量粒细胞集落刺激因子(G．CSF)动员后的外周血单个核细胞数、骨髓单个核细胞数及骨髓粒。单核细胞集落形成单位(CFU．GM)培养计数，对比三组的动员效果有无差别，以探讨糖尿病对骨髓干细胞动员有无影响。通过比较糖尿病动物模型在动员前后血红蛋白、血小板、空腹血糖、血液流变学等各项指标的变化情况，探讨骨髓干细胞动员对糖尿病的影响。中文摘要方法：健康新西兰兔，随机分

6、为A、B、C三组。A组为健康兔10只，B组为糖尿病兔1O只，C组为未成模兔5只(ALX剂量同B组)。A、B、C三组在动员前分别测外周血单个核细胞数，然后三组分别皮下注射lOug／kgG．CSF进行动员，每天1次，连续5天。在应用G．CSF动员期间，每天检测三组外周血单个核细胞数，观察各组动员效果，动员第6天检测三组外周血单个核细胞数，同时三组均抽取骨髓液3ml，分离骨髓单个核细胞，检测骨髓单个核细胞数，并进行CFU-GM培养。B组(糖尿病组)中的10只糖尿病兔在动员前及动员第6天分别监测血红蛋白、

7、血小板、空腹血糖、血液流变学变化情况。结果：1．动员前三组外周血单个核细胞数无差别。动员后三组外周血单个核细胞均较前明显升高，计数比较无统计学差异。动员后三组骨髓单个核细胞数计数比较无差别。2．CFU．GM培养发现，三组均在培养的5～6天开始有集落形成，以后数目逐渐增多，大约12天达高峰，此后集落不断增大，总的集落数不再增加，三组集落培养计数无差别。3．动员前后10只糖尿病兔的晨空腹血糖值有一定的下降趋势，血红蛋白、血小板均有所升高，但变化均无统计学差异。10只糖尿病兔的晨空腹血流变中的血浆粘度及

8、红细胞聚集性动员前后无明显变化；全血粘度动员后较动员前均明显升高。结论：1．糖尿病对骨髓干细胞动员效果无影响。2．应用G．CSF骨髓干细胞动员对糖尿病兔的血糖、血红中文摘要蛋白、血小板无影响，对血流变有影响，提示临床应予重视并干预。关键词：粒细胞集落刺激因子：骨髓干细胞动员；粒．单核细胞集落形成单位；糖尿病动物模型；血流变第三部分自体骨髓干细胞移植治疗兔糖尿病下肢缺血性疾病目的：对比骨髓干细胞移植、皮下注射G-CSF、骨髓干细胞移植联合G．CSF皮下注射三种方法对缺血组织血管新生的