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1、细胞外信号调节激酶在局灶性脑缺血中的表达.L.编辑。【关键词】脑缺血；再灌注；丝裂原激活蛋白激酶类；细胞凋亡；梗塞,大脑中动脉；大鼠 Expressionofextracellularsignalregulatedkinaseinfocalcerebralischemia 【Abstract】AIM:Tostudytheroleofextracellularsignalregulatedkinase(ERK)duringfocalcerebralischemiareperfusioninhippocampalneuronsofrats.
2、METHODS:SixtymaleadultCAO)pusbyTUNELmethod.ERKphosphorylationmunohistochemistry.RESULTS:InI/Rgroupasparedoperationgroup,afterMCAO,thesurvivalneuronsinCA1areasdecreased;alotofapoptoticcellsallevelat72h.CONCLUSION:CerebralischemiareperfusionmayresultintheupregulationofERKact
3、ivity,andparticipateintheprocessofneuronapoptosis. 【Keyia;reperfusion;mitogenactivatedprotEinkinases;apoptosis;infarction,middlecerebralartery;rats 【摘要】目的：研究细胞外信号调节激酶（ERK）在局灶性脑缺血再灌注海马神经元中的表达.方法：线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型.大鼠随机分成假手术组（sham组）、脑缺血再灌注组（I/R组），每组根据再灌注时间不同再分为3,6,24,4
4、8和72h亚组，每亚组各6只鼠.在预定时间点进行HE染色观察组织学变化；TUNEL法检测CA1区细胞凋亡的动态变化规律；免疫组织化学方法研究ERK的表达特征.结果：MCAO后海马神经元存活数量较假手术组明显减少；凋亡细胞大量出现，以48h为高峰；MCAO后3h，磷酸化ERK在局灶性脑缺血大鼠脑组织中显著升高，6h达到最高峰，72h恢复到正常水平.结论：脑缺血再灌注损伤可能导致ERK活性上调，参与缺血后神经细胞凋亡过程. 【关键词】脑缺血；再灌注；丝裂原激活蛋白激酶类；细胞凋亡；梗塞，大脑中动脉；大鼠 0引言 近年来人们对脑缺血再灌
5、注损伤进行了广泛研究，认为细胞信号转导参与调节中枢神经系统神经细胞的损伤.丝裂原活化蛋白激酶（mitogenactivationprotEInkinases,MAPKs）通过磷酸化转录因子而改变基因的表达水平，在细胞信号转导中起着重要作用，参与细胞生长、发育、分化及凋亡等生理、病理过程.MAPKs的3个亚组：ERK,P38和cJun氨基末端激酶（cJunNH2terminalkinase,JNK）.他们可被许多因子激活，并通过调节转录因子活性而控制基因表达［1］.研究发现ERK,p38和JNK在心、脑、肝、肾等组织细胞的缺血/再灌注过程中可
6、被激活［2-3］.我们选用大鼠大脑中动脉栓塞模型，测定在再灌注后不同时间点，缺血脑海马CA1区ERK的活性特征及细胞凋亡的动态变化规律,试图阐明ERK在大鼠脑缺血再灌注过程中所起的作用和机制. 1材料和方法 1.1材料凋亡检测试剂盒、ERK试剂盒、DAB显色剂均购于武汉博士德公司.健康雄性组)、缺血再灌注组(I/R组)，根据再灌注时间不同每组再分为3,6,24,48和72h,5个亚组，每亚组各6只鼠. 1.2.2模型制作根据Nagasam，直到有轻微阻力感为止，实现大脑中动脉阻塞导致脑缺血.结扎入口处，尼龙线外留约1cm，缝合皮肤.2
7、h后轻轻提拉所留线头至略有阻力，实现大脑中动脉再灌注，造模完成.在缺血2h和再灌注1h内，用白炽灯加热维持大鼠的体温，体温维持在肛温36.5～37.5℃.假手术组只分离CCA与ECA.动物模型建立成功后按Longa等［5］法对动物的神经功能进行评分，均在2～3分，即以动物清醒后，爬行时向左转圈（追尾现象），提尾时左前肢内收屈曲.未达到上述标准者视为模型制作失败，不计入实验组.因麻醉未清醒和经解剖发现存在有蛛网膜下腔出血者均视为模型制作失败，不计入实验组. 1.2.3组织切片的制备大鼠再灌注后于3,6,24,48和72h各时间点，用水合氯醛
8、深度麻醉动物后开胸暴露心脏，经升主动脉插管剪开左心耳，用生理盐水250mL快速冲洗，随后用多聚甲醛磷酸盐缓冲液（4℃,pH7.4）先快后慢灌注约250mL固定，断头取脑后,在多聚
