bfgf在局灶性脑缺血再灌注大鼠肝脏中表达的研究

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1、bFGF在局灶性脑缺血再灌注大鼠肝脏中表达的研究【摘要】目的研究碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgroiareperfusioninrats.MethodsFocalcerebralischemiaandreperfusionratmodeliddlecerebralarteryocclusionbyusingthreadinserting.Reperfusionia.After48hoursoftheoperation,thesamplesicroscopy.TheexpressionofbFGFmunohistochemi

2、stryandparedoperation.ResultsThelivercellsinmodelgroupeofthelivercellsoccurredfattychangedandinflammatorycellsinfiltratedoftheportalareas.Thehepaticsinusoidbecamenarrooperatedgroup.TheexpressionofbFGFodelgroupthanthatinShamoperatedgroup.ConclusionThestudyindicatedthatbFGFote

3、livertissuerepairaftercerebralischemiareperfusion.【Keyia,reperfusion,liver,bFGF,rats组织或器官在一定时间缺血缺氧后会造成损伤，血供恢复后损伤会进一步加重称为缺血再灌注损伤（IRI），其中脑缺血再灌注损伤最为常见。脑缺血再灌注损伤是一个复杂的病理生理过程，除导致脑组织病变外，机体多脏器可同时受累，肝脏作为最易受累的器官之一，在临床和实验中受到人们的高度重视，但其机制还不完全清楚［１，２］。碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgroi等［４］线栓法制备

4、大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型。取直径为0.2　mm、长5　cm的尼龙渔线，一端近火将其烧成直径为0.24　mm的球形，使之变成规格一致、头端光滑的栓线，在距栓线头端18　mm、28　mm的位置以记号笔标记。使用前依次用75%乙醇、肝素钠注射液浸泡。大鼠腹腔注射3.5%水合氯醛(1ml/100g)麻醉后，将其仰卧于手术台上，固定四肢及头部，垫高颈部，取颈部正中切口2　cm，显露左侧胸锁乳突肌，钝性分离左侧颈总动脉、颈外动脉和颈内动脉，结扎颈总动脉近心端，并于此结扎线的上方穿线备用，注意避免损伤迷走神经，再结扎颈外动脉，以动脉夹暂时夹闭颈总动脉分

5、叉处，在距动脉夹约1　cm的近心端剪一“V”形小口，将栓线插入，栓线到达动脉夹处时以备用线将其扎住以免滑脱。向外侧轻拉颈外动脉结扎线，栓线沿内上方角度插入，以便顺利进入颈内动脉，避免误入翼腭动脉。栓线前端到达大脑前动脉处遇阻力时止，提示线已阻塞大脑中动脉，此时所做的第一个标记到达颈外动脉和颈内动脉分叉处，第二个标记到达“V”形切口处。剪断多余的结扎线，缝合切口，缺血2　h后轻拔栓线皮肤外的残端，至有阻力时提示线的头端已至颈外动脉，拔出约0.5　cm，实现再灌注。术中及术后环境温度调节在25～30℃左右，密切注意生命体征。1.4动物筛选大鼠麻醉清醒后

6、按Longa等［５］5分制方法进行神经功能评分。0分：无神经损伤症状，活动正常；1分：轻微神经功能缺损，不能完全伸展右侧前肢；2分：中度局灶性神经功能缺损，行走时向右侧转圈；3分：重度局灶性神经功能缺损，行走时向右侧倾倒；4分：不能自发行走，意识丧失。其中得分在1～3分者被认为模型制作成功，纳入实验。并设假手术组，仅模拟手术，不阻塞大脑中动脉，每组各10只大鼠。1.5肝组织病理学观察术后48h，大鼠以3.5%水合氯醛麻醉后，解剖分离肝脏，生理盐水冲净，浸入4%多聚甲醛溶液中固定12　h，修整组织块，PBS冲洗6　h，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包

7、埋，5　μm厚度切片，行HE染色，光镜下观察其组织病理学改变。1.6免疫组织化学染色石蜡切片常规脱蜡至水，3%过氧化氢溶液37℃30min，蒸馏水冲洗后微波修复；PBS漂洗3次，滴加10%山羊血清封闭液，37℃孵育30　min；滴加兔抗bFGF单克隆抗体(1∶400)，4℃孵育过夜；PBS漂洗3次，滴加生物素化羊抗兔IgG(1∶200)，37℃孵育30　min；PBS漂洗3次，DAB显色液显色5　min；苏木素复染，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，光镜观察。阴性对照以PBS代替一抗，其余步骤相同。2结果2.1MCAO模型组大鼠生理行为及脑组

8、织变化MCAO模型组大鼠出现左侧Horner’s征阳性(即左侧眼球下陷，眼裂变小)，不能伸右前肢；提尾时，右前肢内收屈曲，