降钙素基因相关肽在局灶性脑缺血再灌注大鼠脑内的表

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1、降钙素基因相关肽在局灶性脑缺血再灌注大鼠脑内的表【摘要】目的：探讨CGRP在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤时表达状况及其在损伤机制中的作用。方法：建立大鼠大脑中动脉缺血2小时再灌注24小时模型，分别采用TTC染色及RT-PCR法观察大鼠脑组织缺血状况及CGRP的表达状况。结果：假手术组大鼠脑组织形态结构正常CGRP呈弱表达；模型组大鼠大脑缺血区组织明显水肿，CGRP表达较假手术组对应区显著升高，P＜0.05。结论：CGRP参与了局灶性脑缺血再灌注损伤，且可能对缺血性脑损害起到一定的保护作用。【关键词】局灶性脑缺血再灌注大脑中动脉闭塞血红素加氧酶Astudyonexpressionan

2、dsignificanceofSTAT3incerebraltissuesofRatafterfocalcerebralischemiaandreperfusion【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectsoftheexpressionofCGRPincerebraltissuesofratafterfocalcerebralischemiaandreperfusion.Methods2hoursrightintraluminalmiddlecerebralarteryocclusionenofbrainedatthepointafter

3、24hoursreperfusion;expressionsofCGRPethod.ResultsExpressionsofCGRPens,andarklyincreasedafertransientfocalcerebalischemiaandreperfusion(p<0.05)ConclusionExpressionofCGRPisasignificantresponsetotransientfocalcerebralischemia/reperfusionandcontributestotheearlyformasionofvasogenicedemathatcan

4、beobservedallparstofbrains.【Keyia;reperfusion;hemeoxygenase缺血性脑血管疾病是一种致死致残的常见病、多发病。脑缺血再灌注损伤对脑损害的机制是非常复杂的。机制尚不十分清楚，更缺乏有效的治疗方法。降钙素基因相关肽（CGRP）是由37个氨基酸组成的活性多肽，与降钙素为同种基因产物，是目前已知的体内最强的扩血管物质，广泛分布在脑组织中[1]，在缺氧缺血的脑组织中具有有效的细胞保护作用。鉴于此，本研究旨在建立大鼠大脑中动脉缺血2h再灌注24h模型后，通过RT-PCR法检测大鼠脑组织CGRPmRNA表达的变化，探讨CGRP在脑缺血再灌

5、注损伤机制中的可能作用。1实验材料与方法1.1动物与分组北京维通利华实验动物技术有限公司提供的SPF级雄性Sprague-Dam。手术过程中保持环境在25～30℃，且用棉垫和电烤灯维持大鼠体温于37～37.5℃，并一直保持至动物麻醉苏醒。造模成功的标准：动物手术后有明显手术侧（即右侧）Horner征（右侧眼睑下垂，眼球凹陷）及对侧偏瘫体症（不能完全伸展左前肢，行走时向左侧倾倒或转圈）[2]。依上述标准将能够存活24h的大鼠选定为最后的实验对象，并进行行为学评分。1.2.2取材再灌24小时后，在大鼠深度麻醉状态下取脑，距大脑前端4mm处及后端3mm处冠状取2mm厚的脑片，再迅速分离

6、左右脑。用消毒好的锡箔纸包好右侧受损脑组织，立即放入液氮中冰冻，然后取出冻存于－70的冰箱中。切下的脑片迅速置于TTC皿中进行染色，来判断脑损伤的程度。1.2.3缺血区脑组织STAT3的表达按Trizol液的说明书提取总RNA。测定其浓度以及260nm和280nm处吸光度比值（A260/280）。引物由大连宝生物工程有限公司合成，引物序列为：上游引物：5’－ATTGACCTGCCGATGTCCCCCCGCACTTTACATTCA－3’；下游引物：5’－TCACATCGGGGAGGTAGC－3’。总反应体系12μL，30℃反应10min，42℃反应30min，99℃反应5min，5

7、℃反应5min，cDNA产物置于－20℃保存。取5μL逆转录反应液进行PCR扩增，反应条件为94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，扩增28个循环，产物－20℃保存。取PCR产物5μL经琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下观察结果，拍照并用光密度仪扫描分析。通过β-actin光密度值进行标准校正，计算CGRPmRNA的表达。2统计学处理应用bandleaderver.3.0图像分析软件对PCR电泳图像进行分析，把图像信号转化为数字信号，再用SPSS13.0进行统计分析。实验数