冬虫夏草菌丝体发酵液中多糖的分离纯化与含量测定论文

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1、冬虫夏草菌丝体发酵液中多糖的分离纯化与含量测定论文【摘要】［目的］从冬虫夏草菌丝体发酵液中提取，分离虫草多糖，并建立样品中多糖的含量测定方法。［方法］采用D101大孔树脂分离冬虫夏草菌丝体发酵液中的多糖；采用苯酚-硫酸法测定样品中多糖含量。［结果］虫草多糖的得率为142g/L；样品中虫草多糖的含量为706%。［结论］方法简便，准确，重现性好，可用于冬虫夏草菌丝体发酵液中虫草多糖的提取纯化和含量测定。【关键词】冬虫夏草菌丝体发酵液多糖大孔树脂分离纯化含量测定Separation,PurificationandContentTestofPolysacchar

2、ideinZymoticFluidofCordyceptsMyceliumAbstract：［Objective］ToextractandseparatepolysaccharidefromCordycepsmycelium,andestablishcontenttestmethodofpolysaccharideinsample.［Method］TakeforamenmagnumresinD101toseparatepolysaccharidefromthezymoticfluidofCordycepsmycelium,thephenol-SO2metho

3、dtomeasurepolysaccharideinsample.［Result］Thereceivingrateofpolysaccharidesample.［Conclusion］Thesaidmethodissimple,convenient,correct,canbeusedforseparation,purificationandcontentmeasurementofpolysaccharidefromthezymoticfluidofCordycepsmycelium.KeyoticfluidofCordycepsmycelium;polysa

4、ccharide;foramenmagnumresin;separationandpurification;contentmeasurement冬虫夏草(Cordyceps)为麦角菌科真菌冬虫夏草菌Cordycepssinensis（Berk.）Sacc.寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体，是高级滋补药品和名贵中药材。随着它的药用价值不断增大和药用范围的不断扩大，对虫草的需求量也在不断的增加。但是.freelL，用80%乙醇沉淀3次，室温下放置24h，离心15min（3000r/min），弃去上清液，取沉淀物，减压干燥，得粗多糖219g。2

5、2虫草粗多糖纯化取上述粗多糖219g，加水66mL溶解，取水溶液，采用sevag法［4］（1/5体积的氯仿，及1/5体积的正丁醇，剧烈震荡，静置分层后，过滤，取水层）去除蛋白质，操作3次后，将水层减压蒸干，用95%乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤粗多糖，减压干燥，得纯化粗多糖184g。23虫草多糖精制231树脂预处理［5］取市售D101大孔吸附树脂，用乙醇加热回流洗涤，至洗脱液蒸干后无残留物，反复洗脱保存备用。232装柱以乙醇湿法装柱，用纯乙醇反复洗脱，至洗脱液与水混合不呈白色混浊为止（取1mL乙醇液加5mL水），再以蒸馏水洗脱至洗脱液无醇味，备用。2

6、33精制将纯化的粗多糖溶解(上样量∶树脂量=1∶8~10)加到已处理好的D101大孔吸附树脂柱上，先用水洗脱至洗脱液无色，流速约为1mL/min，再用5倍量柱体积的30%乙醇、5倍量柱体积的50%乙醇洗脱，流速约为1mL/min，分别收集洗脱液。最后用95%乙醇洗脱至树脂无色，备用。斐林反应［6］表明：多糖主要集中在水洗脱部位，浓缩水洗脱液后得到精制多糖104g，得率为142g/L。24样品中虫草多糖的含量测定241对照品溶液的制备取于105℃干燥至恒重的葡糖糖对照品2500mg，精密称定，置500mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，得0

7、5mg/mL的葡萄糖对照品溶液。242标准曲线的制备精密量取对照溶液20ml、40ml、60ml、80ml、100ml于50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。分别精密吸取以上对照品溶液10ml于10ml试管中，加5%苯酚［7］试液10ml，摇匀，迅速加浓硫酸50ml，振摇2min，置沸水浴中加热30min后，取出冷却至室温。另量取10ml蒸馏水按上述方法操作，作为空白对照。在490nm波长处分别测定吸光度，以吸光度值A为纵坐标，葡糖糖浓度C为横坐标，进行线性回归，得回归方程为A=00077C－00002，r=09971243样品

8、测定取虫草多糖样品640mg，精密称定，置1000